巴贝斯虫病新型实验室诊断方法的建立

Hebei无交叉反应。此外，它可以检测低至1个iRBCs / 200 μ l或1个质粒拷贝/ 20 μ l。O'Connor 等人开发了一种靶向B. duncani的β- tubμlin基因的巢式PCR方法，可以检测一个模板DNA拷贝[114]。然而，该方法涉及耗时的琼脂糖凝胶电泳分析，并且B. microti的靶标序列长度比B. duncani和其他巴贝斯虫亚种的扩增片段仅仅小了约15 bp。这么微小的差异较难通过电泳分析明确区分。Wilson等人利用微滴式数字PCR技术，在一个反应体积内可以检测到10个基因拷贝数，可以区分B . microti和B . duncani[115]。Stanley 等人利用cobas Babesia ( Roche Molecμlar Systems公司)检测B . duncani，检测限为50.2 iRBCs / mL [116]。因此，这两种方法的分析灵敏度均低于本研究开发的巢式qPCR。

本研究建立的巢式qPCR方法克服了qPCR方法检测金黄地鼠血液中B. duncani感染灵敏度较低的局限性。通过对PCR产物[131-133]的测序结果分析，传统PCR方法在检测血液原虫容易受宿主DNA干扰方导致特异性和灵敏度较差。因此，对PCR扩增产物进行qPCR扩增，以增加目的基因的特异性扩增，提高检测准确性和灵敏度。优化后的方法具有很多优点，比如无需凝胶电泳、不需要耗时且成本高的测序、不需要昂贵的仪器等优点。高效能的巢式qPCR可以在窗口期准确鉴定B. duncani感染。这弥补了免疫荧光和荧光原位杂交等免疫学方法无法区分既往感染和现证感染的缺陷[134, 135]。此外，qPCR可用于高通量筛选[27]，这弥补了金标准显微镜检查法以及血清学方法不能大批量检测的缺点。

结论

本研究建立了一种高灵敏度、高特异性的检测B. duncani的巢式qPCR方法。巢式qPCR靶向18S r RNA基因的保守区和高变区，特异性与ME相当，敏感性高于ME和巢式PCR。本研究也证实甘肃省部分具有蜱叮咬史的患者未感染B. duncani。 

本研究建立的巢式qPCR方法可在寄生虫多样性较为丰富的地区准确诊断B. duncani，可用于监测B. duncani的流行病学现状。这可能是一个非常有价值的诊断工具，特别是在B. duncani流行率较高、且医疗水平和测序设施不发达的地区。

参考文献（略）