本文是一篇医学论文，本研究从氧化应激、自噬和凋亡方面观察高碘对中性粒细胞功能的影响。研究在高碘诱导的损伤下，硒维持中性粒细胞功能稳定的机制，为硒制剂治疗桥本氏甲状腺炎提供新的理论依据。
第一章 初探高浓度碘诱导NETs形成的机制
1.2实验方法
1.2.1 HL-60细胞培养
（1）在进行细胞培养之前，提前做好实验前的准备工作。提前紫外照射细胞超净台30 min，准备好细胞培养所需要的实验耗材，提前将胎牛血清从-20℃冰箱中取出放置常温，同时将RPMI-1640不完全培养基从冰箱中拿出，放于常温，同时避免紫外线照射。配置好500 ml的RPMI-1640完全培养基（含10%胎牛血清和1%青霉素-链霉素），完全培养基的配置要在严格无菌的条件下进行，避免细菌和其他微生物的污染。在保存完全培养基时，将其放于4℃保存，有效期为2周。
（2）培养HL-60细胞时，注意培养瓶的选择和培养基的添加量。将人早幼粒白血病细胞（HL-60）培养于25T培养瓶中，加入5 ml的RPMI-1640完全培养基。将细胞悬液放置于细胞孵育箱中，注意控制温度（37℃）和CO2浓度（饱和湿度5%），保持恒定的培养条件，以便细胞能够稳定地生长和繁殖。同时在培养过程中要注意细胞密度的控制，避免细胞过度生长和过度密集，影响细胞的生长和实验结果。
（3）每天观察HL-60细胞的数量、细胞形态和细胞黏附情况等。根据细胞状态及时更换培养液。细胞培养过程中需要控制完全培养基的PH值和温度，以保证细胞生长所需要的适宜环境。
1.3结果
1.3.1中性粒细胞诱导成功
HL-60细胞经DMF刺激后5 d后，可以分化为中性粒细胞。从流式检测结果中可以看出（图1-1所示），横坐标代表FITC-CD66b，纵坐标代表APC-CD11b。诱导前HL-60细胞表面标志物CD11b＋与CD66b＋双阳性率＜0.2%（A图Q2-2），HL-60经DMF诱导5 d后，CD11b＋与CD66b＋双阳性率＞99%（P <0.0001）（B图Q2-2），表达明显显著升高，即中性粒细胞诱导成功，可用于后续实验。
2.1结果
2.1.1 筛选最佳的亚硒酸钠浓度，进行分组
通过流式细胞仪对荧光值的结果分析，M2-2代表ROS阳性细胞占全部细胞中的百分比。由图2-1结果可知，与对照组相比：100 nM组ROS水平无统计学差异（P＞0.05），200 nM组ROS水平增高（P＜0.01），300 nM组ROS水平增高（P＜0.01），400 nM组ROS水平增高（P＜0.01），500 nM组ROS水平增高（P＜0.01）。上述结果提示，在亚硒酸钠刺激下，中性粒细胞可以产生适量的ROS。但在最高浓度（500 nM）时，ROS水平减少。这种现象可能是由于硒浓度过高，激活了硒特有的抗氧化剂，如谷胱甘肽，从而降低细胞内的ROS水平，减轻高浓度硒诱导的细胞的毒性[45]。因此在筛选硒浓度时，为了避免超过中性粒细胞的毒性阈值，以免影响实验的准确性，选择最佳的亚硒酸钠浓度，即低浓度硒组（200 nM）和高浓度硒组（400 nM），进行后续实验。
2.2讨论
硒在类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮等自身免疫性疾病中也发挥着重要的作用。研究表明[46]，硒可以通过调节NF-κB信号通路减轻氧化应激损伤、抑制炎症因子产生等方式发挥抗炎作用，从而减轻类风湿关节炎的症状。硒不仅在抗氧化中发挥着重要的作用，同时硒在调节甲状腺激素的合成和代谢方面也发挥着至关重要的作用。有研究指出[32]，硒酵母具有降低TPOAb和TGAb的能力。在陕西6000多人的调查中发现[47]，血清中硒浓度越高，甲状腺患病率越低——血清中较高的硒浓度与HT、甲状腺功能减退、亚临床甲状腺功能减退和甲状腺肿大等疾病的患病几率呈负相关。同时，动物研究表明[48]，高碘饮食会对自身免疫性甲状腺炎模型大鼠的甲状腺造成损伤，但在适量补充硒后，甲状腺坏死和炎症程度明显减轻。因此，维持体内足够的硒元素水平对甲状腺健康至关重要。
相对于其他硒化合物，亚硒酸钠的毒性较小，在细胞实验中的安全性更高，且亚硒酸钠的作用机制已经被广泛研究[49,50]，因此选择使用亚硒酸钠预处理中性粒细胞。采用免疫荧光的方法，观察NETs标志物CitH3的表达，实验结果表明，硒可以抑制高碘诱导的NETs释放。此外，本实验还发现随着硒浓度的增加，NETs的释放水平也逐渐减少。这一发现初步证实了硒可以抑制高碘诱导的NETs释放，并为硒制剂治疗桥本氏甲状腺炎提供了新的理论支持。
第二章 硒通过 AMPK-mTOR 通路缓解中性粒细胞在高碘环境中的损伤 ...................... 32
2.1 结果 .......................... 32
2.1.1 筛选最佳的亚硒酸钠浓度,进行分组 ................ 32
2.1.2 亚硒酸钠可以抑制高碘诱导的NETs释放 ........................... 33
2.2 讨论 ............................ 37
结论 ........................... 40
2.2讨论
硒在类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮等自身免疫性疾病中也发挥着重要的作用。研究表明[46]，硒可以通过调节NF-κB信号通路减轻氧化应激损伤、抑制炎症因子产生等方式发挥抗炎作用，从而减轻类风湿关节炎的症状。硒不仅在抗氧化中发挥着重要的作用，同时硒在调节甲状腺激素的合成和代谢方面也发挥着至关重要的作用。有研究指出[32]，硒酵母具有降低TPOAb和TGAb的能力。在陕西6000多人的调查中发现[47]，血清中硒浓度越高，甲状腺患病率越低——血清中较高的硒浓度与HT、甲状腺功能减退、亚临床甲状腺功能减退和甲状腺肿大等疾病的患病几率呈负相关。同时，动物研究表明[48]，高碘饮食会对自身免疫性甲状腺炎模型大鼠的甲状腺造成损伤，但在适量补充硒后，甲状腺坏死和炎症程度明显减轻。因此，维持体内足够的硒元素水平对甲状腺健康至关重要。
相对于其他硒化合物，亚硒酸钠的毒性较小，在细胞实验中的安全性更高，且亚硒酸钠的作用机制已经被广泛研究[49,50]，因此选择使用亚硒酸钠预处理中性粒细胞。采用免疫荧光的方法，观察NETs标志物CitH3的表达，实验结果表明，硒可以抑制高碘诱导的NETs释放。此外，本实验还发现随着硒浓度的增加，NETs的释放水平也逐渐减少。这一发现初步证实了硒可以抑制高碘诱导的NETs释放，并为硒制剂治疗桥本氏甲状腺炎提供了新的理论支持。
结论
1.高碘刺激中性粒细胞释放ROS，激活下游AMPK通路，促进细胞自噬释放NETs，促进细胞凋亡。
2.硒通过AMPK-mTOR通路，抑制高碘诱导的中性粒细胞自噬、NETs和凋亡水平。
参考文献（略）
