【摘要】目的 比较胶带粘面汗潜指印中DNA提取的方法。方法 分别采用硅珠法、QIAMicro kit法、硅珠-QIAMicro kit法提取胶带粘面的汗潜指印中DNA, STR复合扩增,荧光电泳检测。结果 用QIAMicro kit法、硅珠-QIAMicro kit法提取胶带粘面汗潜指印中DNA,检测成功率分别为21%和36%。硅珠法检测未获成功。结论 硅珠-QIAMicro kit法提取胶带粘面汗潜指印中的DNA比QIAMicro kit法,检验时间更短,检测成功率更高。
【关键词】法医物证学 胶带 汗潜指印 DNA分型 STR分型
Compare w ith the threemethods ofDNA extraction of sweat latent fingerprint on the adhesive sideof tape
【Abstract】ObjectiveTo comparatively analyze theDNA extracted from sweat latent fingerprintson theadhesive side of tapes by three kinds ofmethods.M ethodsDNAwas extracted from sweat latent fingerprinton the adhesive side of tapes using silicon bead tes,t QIA microKit and combined silicon bead-QIA microKi.t STR lociwere detected bymultiplexPCR procedures. ThePCR productwas http://www.51lunwen.org/fayixue/electrophoresed on anABI3100 GeneticAnalyzer.Results36% of the sweat latent fingerprints on the adhesive side of tapeswas suc-cessfully genotyped using combined silicon bead-QIA microKi,t and 21% usingQIA microKi.tConclu-sionDNA genotyping of the sweat latent fingerprints on the adhesive side of tapes reveals higherpossibilityusing combined silicon bead-QIA microKit than usingQIA microKit and is less time-consuming.
【Key words】Forensic physical evidence; Adhesive tape; Sweat latent fingerprin;t DNA genotype; STRgenotype
在刑事案件的侦查中,时有发现犯罪用胶带来限制被害人的人身自由、捆扎粘贴物体和粘附尸体外包装的情况。由于胶带的粘附性和盘卷状,使犯罪嫌疑人在使用胶带时须裸手、用力,较易在胶带上留下其手印[1]。又由于胶带上指印经常会存在模糊、拖擦、显现困难等影响形态学比对、进行个体识别的情况。从法医DNA检验角度来讲,研究胶带上指印DNA分型,同样可对犯罪嫌疑人进行个体识别。胶带汗潜指印及其光面汗潜指印中的DNA的提取已有文献报道[1-4]。
但由于压敏胶的粘性[2,3],胶带粘面汗潜指印中的DNA提取具有很高的的技术难度[6]。本文作者以黄色封箱宽胶带和无色宽透明胶带上的汗液指印作为研究对象,探讨其粘面指印中的DNA提取方法。
1 材料与方法
1. 1 材料152例捺印在黄色封箱胶带(鹿头牌,四达企业)、无色透明胶带(鹿头牌,四达企业)上的汗液指印来自25名自愿者。在胶带粘面上捺印汗潜指印时,用力中等(1000g左右),时间3s。
1. 2 方法
1. 2. 1 DNA提取 分别采用下述方法提取样本DNA:
(1)硅珠法[5]。按Invisorb ForensicKit(Invitek,German)说明书步骤,剪取捺有指印面积部分的胶带,加入LysisBuffer500μl(主要含硫氰酸胍),56℃消化3h;离心,上清加二氧化硅悬浮液15μ,l振荡混匀后室温放置1h以上;离心,弃上清,沉淀分别用500μl洗液洗2次;离心,沉淀于60℃、保温15min,至硅珠干燥;加15μl去离子水,56℃保温5min,14 000r/分离心5m法医学论文in,吸取上清10μ,l待PCR扩增。(2)QIAMicroKit法(QIAamp DNAMicroHand-book,USA, QIAGEN,2003)。按QIAMicroKit(QIAGEN,USA)说明书步骤,先在离心管中加入250μlBufferATL,再剪取捺有指印面积部分的胶带放入其中,加入20μlPK,56℃保温过夜后,加入250μlBufferAL,70℃保温8h;10 000r/min离心30s,吸取离心管中溶液(去载体)加入QIA miniElute柱, 8000r/min离心1min,弃收集管,将QIAminiElute柱移至新收集管;小心加入500μl BufferAw1,8000r/min离心1min,弃收集管,将QIA miniElute柱移至新收集管;小心加入500μl BufferAw2, 14 000r/min离心3min,弃收集管,将QIA miniElute柱移至新收集管;小心加入20μl无菌水,室温保温5min以上,8000r/min离心1min,用于PCR扩增。(3)硅珠-QIAMicroKit法。先在离心管中加入250μl硅珠法中的裂解液,再剪取捺有指印面积部分的胶带放入其中;加入PK 20μ,l56℃保温2h;加入250μlBufferAL缓冲液,70℃保温1h。
以下步骤同QIAMicroKit法。
1.2. 2 STR分型检测 按ProfilerPlus试剂盒(ABI,USA)说明书操作。热循环条件: 95℃预变性11min,94℃变性1min, 59℃退火1min, 72℃延伸1min,循环28次,最后60℃延伸45min。电泳检测在3100型基因分析仪(ABI,USA)上进行。GeneScan3. 7和Geno-typer3. 7软件分析电泳检测结果。
2 结 果
硅珠法、QIAMicroKit法和硅珠-QIAMicroKit法提取胶带粘面指印中DNA的检测结果见表1检测成功ProfilerPlus试剂盒中的性别基因座和9个基因座,其峰高均高于100 rfu(相对荧光素单位),DNA图谱与提供指印者的唾液对照DNA图谱完全一致。
表1 3种不同方法提取胶带粘面指印DNA的检测成功结果Table1 The DNA analysis results of sweat latent fingerprint onthe adhesive side of
tapes by the threemethods
图1显示一个体捺印在胶带粘面的指印经QIAMicroKit法提取后检测成功例。由图可见,所有基因座的峰高均高于100,并与该个体的唾液对照DNA图谱(图2)完全一致。
图3显示另一个体捺印在胶带粘面指印DNA经硅珠-QIAMicroKit法提取后检测成功例。由图可见,所有基因座的峰高均高于500,并与该个体的唾液对照DNA图谱(图4)完全一致。
图5分别显示了同一个体同时分别捺印在透明胶带粘面上的2枚指印,经QIAMicroKit法提取和硅珠-QIAMicroKit法提取的DNA检测结果的差异。
由图可见,胶带粘面指印DNA经QIAMicroKit法提取后检测结果不够理想(图5上),所有基因座峰高均较低,其中vWA、D8S1179、D18S51、D13S317、Amelogenin基因座的峰高低于40,影响结果的正确判读;胶带粘面指印DNA经硅珠-QIAMicroKit法提取后DNA检测结果理想(图5下),所有基因座峰高均高于150,杂峰峰高均低于正常峰高的20%,结果可以正确判读。
3 讨 论
胶带一般由基材、底涂剂、压敏胶粘合剂、背面处理剂组成,其中最重要的压敏胶粘合剂,具有对压力敏感的粘附特性[3]。在胶带粘面上捺指印,是通过粘附和剥离[1],使得手指表面的上皮细胞被粘附在胶带的压敏胶面上。在胶带粘面汗潜指印的DNA提取过程中,使指印中的上皮细胞完全溶解到液态的提取试剂中,是粘胶带上指纹DNA提取的关键。本研究尝试了3种提取胶带粘面汗液指印中DNA的方法[6],用硅珠法提取,检测未能成功;用QIAMicroKit法和硅珠-QIAMicroKit法提取出胶带(含黄色胶带和透明胶带)粘面汗潜指印中DNA,前者检测成功率21%,后者36%。
采用硅珠法提取胶带粘面汗潜指印中法医学论文DNA,裂解液中的GuSCN不仅具有较强的裂解消化DNA的作用,而且GuSCN溶液作为一种有机溶剂,能够快速、彻底地溶解粘胶带上的丙烯酸酯粘胶,使汗潜指印中的脱落上皮细胞和丙烯酸酯一起溶解于提取试剂中[
