摘要:[目的]研究单亲和双亲亲子鉴定结果的准确性。[方法]采用AmpFe STRTMIdentifilerPlusTM荧光标记复合系统,通过310遗传分析仪对213例亲子鉴定进行基因型分型。[结果]双亲排除案例的排除指标均为3个以上。单亲排除案例中,观察到3例排除指标小于3个,后经增加检测母亲遗传信息,排除指标均大于3个。排除案例中双亲组的排除指标比单亲组平均多2个。不排除案例中,双亲组的RCP均大于99.9999%;在单亲组中RCP值明显偏低,有29.3%案例低于99.73%,只有24%的案例RCP大于99.99%。[结论]缺少一方的单亲鉴定对鉴定结果有明显影响。
关键词:STR 亲子鉴定 亲子关系指数 基因鉴定
Analyze difference of paternity testing between single-parent group and double-parent goup
Abstract:[Objective] Study the accuracy of single-parent and double-parent paternity-testing.[Methods]AmpFe STRTMIdentifiler PlusTMkit was used to perform PCR, the amplified products were processed throughABI PRISM310 genetic analyzer and the genotypes of all alleles was gotten through GeneScan software andGenoTyper software.[Results] In all excluding cases of double-parent group, the excluded STR loci were morethan 3; compared in the simple-parent group that there were 3 cases the excluded STR loci were less than 3,when in those cases the mother sample was added, the excluded STR loci exceeded 3. The mean excluded STRloci in the double-parenthttp://www.51lunwen.org/fayixue/ group were 2 more than that in simple-parent group. In no-excluded cases, theRCP of all the double-parent group were more than 99.9999%, but in the simple-parent group, 29.3% cas-es were less than 99.73% and only 24% cases exceeded 99.99%. [Conclusion] Absence one of parent samplewill obviously influence the paternity-testing result.
Key words:STR; Paternity Testing;RCP;Gene-test
目前在非诉讼亲子鉴定中,单亲亲子鉴定的比例已远远超过双亲,但由于缺少父母一方的遗传信息,所以存在认定概率低的问题和误判的风险,在采用血清学技术进行检验时,这种风险更高。随着DNA分子检测技术的发展,特别是短串联重复序列(STR)技术在亲子鉴定上的应用[1],突破了传统血清学和HLA检测技术的限制,极大提高了亲子鉴定的准确性。但单亲和双亲亲子鉴定有很大不同,本文比较单亲和双亲亲子鉴定的异同,探讨单亲亲子鉴定的准确性。
1 材料和方法
1.1 样 品本中心受理的213例亲子鉴定案例样本,其中165例为父子单亲鉴定,48例为父子母双亲鉴定。
每人提取口腔拭子两枚,一枚供检验,一枚保存供复核。
1.2 方 法DNA提取采用Chelex-100方法[2](Sigma公司,美国);试剂选用AmpFe STRTMIdentifilerPlusTM(ABI公司,美国)试剂盒,扩增位点为D8S1179、D21S11、D7S820、CSF1PO、D3S1358、THO1、D13S317、D16S539、D2S1338、D19S433、VWA、TPOX、D18S51、D5S818、FGA和Amelogenin性别位点; Perkin-Elmer GeneAmp PCR System9600型PCR仪扩增;采用310型DNA sequence an-alyzer进行电泳检测;Genescan-500 Liz内标,POP-4液态胶,60℃15KV电泳24 min。
1.3 亲子鉴定判断方法排除亲子关系的标准:排除亲子关系的STR位点≥3个;不能排除亲子关系的,计算亲子关系概率(RCP),计算方法[3]如下:
RCP=PI总/(PI总+1)×100%; PI总=PI1×PI2×PI3×…×PIn双亲(三联体)与单亲(二联体)的亲子关系指数(PI)计算方法不同。三联体PI计算方法如下:
PI=X/Y,其中X=f×C;Y=f×g(f为生母给孩子必需等位基因机会;C为待检父亲给孩子必需等位基因机会;g为必需等位基因的频率)。
由于母亲遗传信息的缺失,单亲PI的计算有其特殊性,简便计算方法见表1。PI计算中的有关基因频率为本实验室统计数据。
2 结 果
2.1 排除案例在213例亲子鉴定样本中,单亲亲子鉴定165例,不排除133例,排除32例,排除率为19.39%;在双亲亲子鉴定48例中,不排除39例,排除9例,排除率为18.75%。双亲的排除案例中排除亲子关系的STR位点均为3个以上。但在165例单亲鉴定中,有3例出现排除亲子关系的STR位点数小于3个,后经检测母亲基因位点,排除指标均大于3个。在双亲鉴定的排除案例中,如果隐匿母亲遗传信息,检测结果的排除指标数会减少1~2个,但是结论不变,没有出现误判。双亲排除案例的平均排除指标数为6.5个;单亲排除案例的平均排除指标数为4.7个。排除指标数情况见图1。
在41例排除案例中,不同的STR位点,出现的概率不同,D8S1179出现的概率最高,为61.11%;D21S11、D5S818、FGA、D7S820、D18S51、D13S317约在50%左右;TPOX、THO1和CSF1PO仅占10%以下,D3S1358、D16S539、VWA、D2S1338、D19S433在10%~30%。各STR位点在排除案例中出现的规律见图2。
2.2 认定案例在不排除亲子关系的案例中,将RCP值分为3个范围:小于99.73%,99.73%~99.99%,大于99.99%;单亲和双亲的RCP值见表2。
在133例单亲不排除案例和39例双亲不排除案例中,双亲RCP值均大于99.9999%,最大RCP值为99.99999999%;而单亲的RCP值明显偏低,有29.3%低于99.73%,只有24%的案例RCP大于99.99%。
3 讨 论
短串联重复序列(STR)目前已广泛应用于亲子鉴定中。本中心采用16个STR位点的AmpFeSTRTMIdentifiler PlusTM试剂盒进行日常亲子鉴定。
在工作中作者观察到来进行亲子鉴定的,许多为父—子组合的单亲亲子鉴定,其原因多为母亲不配合、父亲另有隐情不希望母亲知道、节省检测费用等。
由于父—子组合缺少母亲的遗传信息,势必在排除信息和RCP值等方面都要低于父—母—子组合的亲子鉴定,影响到亲子鉴定的准确性。
由于STR基因的高突变性[4],普遍认为排除亲子的STR指标数应有3个以上。本文在41例排除案例中观察到,所有排除案例中排除指标数均大于3个。如果排除指标小于3个,应增加母亲样本或STR基因位点。本文作者观察有5例出现小于3个排除指标,后经增加母亲遗传信息,排除指标均大于3个。比较排除案例中单亲和双亲组的排除指标发现,双亲比单亲组的排除指标数平均高出2个。
本文选用的16个基因位点中, D8S1179、D21S11、D5S818和FGA基因座多态性[5]最高,其DP≥0.95,H≥0.85,PE≥0.65;TH01和TPOX基因座在多态性方面较差,其H<0.7,PE<0.41。在观察41例排除案例中,基因位点D8S1179的出现概率最高,为60%以上, D21S11、D5S818、FGA、D7S820、D18S51、D13S317的排除率也在50%左右,而TPOX、THO1和CSF1PO仅占10%以下,表明基因位点多态性越高,在排除关系中的实际应用越好。
认定亲子关系的主要是依据RCP值,目前国内对RCP没有统一的认定标准,普遍认为RCP在99.73%以上就可以认定亲子关系的。随着DNA检测技术的发展,RCP的标准会不断提高,目前诉讼案件的RCP至少应达到99.99%以上。本文的研究中,所有双亲认定案例均超过这一标准,最高可达99.99999999%以上,基本满足鉴定要求。然而对于单亲案例,只观察到32例(24.06%)法医学论文的RCP达到99.99%;有62例(46.62%)的RCP值在99.73%~99.99%;
