（5）加酶标二抗：PBST 洗板 4 次，每孔 200 μl，每次间隔 5 min，弃去溶液后拍干。取二抗按 1:20000 用 PBST 稀释后加入，每孔 100 μl，于 37 ℃恒温箱孵育 1 h。
（6）显色： PBST 洗板 4 次，每孔 200 μl，每次间隔 5 min，弃去溶液后拍干。加入显色液，每孔 100 μl，于 37℃恒温箱孵育 15 min。
（7）终止：每孔加入 50 μl 终止液，终止反应，酶标仪测定 OD450nm。
第五章 全文总结
1、本研究对F22进行质谱鉴定，从结果中筛选出FgSAP-2、FgCatL2、FgLAP作为诊断抗原候选分子并对这三种分子进行了原核重组表达，SDS-PAGE鉴定三种重组表达蛋白分子的质量较好。从rFgSAP-2、rFgCatL2、rFgLAP三种重组诊断抗原中筛选出rF gSAP-2并与F22作为诊断抗原分别建立起牛大片形吸虫病间接ELISA诊断方法。通过对建立的F22、rFgSAP-2作为诊断抗原的牛大片形吸虫病间接ELISA法进行敏感性、特异性、稳定性的检测并与FgESP作为诊断抗原的间接ELISA法进行比较，表明三种诊断抗原特异性类似且稳定性均较好，其中F22作为诊断抗原检测敏感性最高，FgESP和rF gSAP-2作为诊断抗原检测的敏感性接近。FgESP、F22、rF gSAP-2作为诊断抗原均能在感染后2周检测到抗体，其中F22作为诊断抗原的早期诊断效果最佳。
2、成功研制F22作为诊断抗原的牛大片形吸虫病胶体金快速诊断试纸条，该试纸条具有良好的敏感性、特异性与稳定性，可以应用于牛大片形吸虫病的现场快速诊断。
3、利用新建立的以F22作为诊断抗原的间接ELISA法和传统FgESP作为诊断抗原的间接ELISA法对广西地区牛片形吸虫病进行流行病学调查，发现两种抗原检测的阳性率均较高，分别为68.37%和57.30%，表明广西地区牛片形吸虫感染严重。利用建立的ELISA法及胶体金法对广西壮族自治区A牛场牛血清进行检测，表明水牛所牛大片形吸虫感染率低。
4、问卷调查发现广西地区牛场对大片形吸虫病不够重视。水牛用药试验初步表明广西壮族自治区A牛场的用药方案具有较好的驱虫效果，对广西地区针对牛大片形吸虫病的用药有借鉴意义。
参考文献（略）
