表 4-1 主要试剂
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主要结论与展望
主要结论
本篇论文中，主要采用硫酸乙酰肝素类似物刺激肿瘤细胞获得衍生的外泌体，再将获得的不同来源的外泌体加入到肿瘤细胞中，探讨硫酸乙酰肝素类似物对外泌体生成以及功能方面的影响。得到了如下结论：
1.通过对硫酸乙酰肝素衍生物的制备和表征成功制备了 6-O-DeSH的产物，通过FT-IR、NMR、GPC-MALLS等方法进行了结构的表征，明析了硫酸乙酰肝素类似物主要结构。
2.在肿瘤细胞中加入硫酸乙酰肝素类似物，通过多种提取方式获得了外泌体，通过TEM、Nanosight、Western blot法等方法验证了外泌体成功的被提取。采用MTT法、Western blot法、BCA法等方法进行外泌体生成方面的研究，结果表明肝素组显著抑制了外泌体的生成，在 6-O位置的硫酸根去除后，外泌体的分泌不再被抑制。证明了在硫酸乙酰肝素类似物的结构上 6-O位置的硫酸根的存在对抑制肿瘤外泌体的分泌起着重要的作用。在不同的分子量大小的组别中，外泌体的数量和组成呈现出抑制效果。
3.硫酸乙酰肝素类似物对肿瘤外泌体功能的影响，主要体现在对肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭方面，采用了MTT、Wound healing、Transwell等方法，结果表明不同分子量的类似物对外泌体的功能呈抑制作用，6-O的去硫酸化使得抑制作用减弱。
4.影响机制的初步探索中发现，不同分子量及不同位点的硫酸化对相关细胞因子的表达和乙酰肝素酶的表达均有影响。在促进肿瘤生长的细胞因子IL-6 的表达上，不同分子量组呈现出显著的抑制作用，在 6-O硫酸根基团去除后，这种抑制作用显著减弱。乙酰肝素酶作为促进肿瘤生长的一种诱导剂，在肝素组呈现出显著表达降低，在 6-O硫酸根基团去除后，表达显著上升。因此，不同结构HS类似物可能通过调控肿瘤外泌体负载的相关蛋白表达而影响肿瘤外泌体的生物学功能。
综上所述，肝素可以减少肿瘤来源的外泌体的分泌和蛋白质运输。此外，来自暴露于肝素的肿瘤细胞的外泌体会减弱肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭。根据HP、LMWH和6-O-DeSH的硫酸化模式和分子量的差异，证明了硫酸乙酰肝素在 6-O位置的硫酸根可能在肿瘤衍生的外泌体形成和功能中起重要作用，且其可能的机制在于HS类似物结构对肿瘤外泌体负载相关蛋白表达差异的影响。
参考文献（略）
