本文是一篇药学论文,研究者从毛兰属植物中共分离并鉴定了 49个化合物,其中菲类、甾体类、联苄类和三萜类化合物是毛兰属植物的主要和特征性成分。虽然我国毛兰属植物的种类仅次于印度(53 种),但国内对毛兰属植物的化学成分和生物活性的研究还不充分,仅陈业高团队和我们团队分别对竹叶毛兰和禾叶毛兰的化学成分进行了初步研究。
第一章 节茎石仙桃的化学成分研究
1.1 实验部分
1.1.1 实验仪器与试剂
1.1.2 样品采集与提取
本实验所用植物于 2016 年 6 月采自云南省保山市龙陵县,由中国科学院昆明植物研究所刘恩德博士鉴定为兰科石仙桃属植物节茎石仙桃 Pholidota articulata Lindl.,标本存放于大理大学药学院实验室。
取自然阴干的节茎石仙桃 P. articulata 全草 5.6 kg,粉碎,用 78%的乙醇(20 L,10 L,10 L,10 L)在室温下冷浸提取 4 次(24 h,24 h,48 h,48 h),收集并过滤提取液,减压浓缩得浸膏。将浸膏加适量超纯水(电阻率≥18.2 MΩ·cm),摇匀,使其完全分散,依次用石油醚(PE)、乙酸乙酯(EtOAc)及正丁醇(n-BuOH)各萃取 3 次(2 L,2 L,1 L),减压浓缩得到萃取物 PE(2.0 g)、EtOAc(142.0 g)和 n-BuOH(207.1 g)。
1.2 结果与讨论
本研究继续对节茎石仙桃的化学成分进行分析,从节茎石仙桃全草的乙酸乙酯萃取物中分离鉴定了 22 个化合物,包括 7 个菲类(1 ~ 7)、3 个联苄类(8 ~ 10)、3 个香豆素类(15 ~ 17)、2 个甾醇类(12,13)、1 个二苯乙烯类(11)、1个五环三萜类(14)以及 5 个其他类型化合物(18 ~ 22)。化合物 3,4,7,10,11,13 ~ 17,19 ~ 22 为首次从节茎石仙桃中分离得到。其中 6 个化合物(10,14 ~ 17,22)在石仙桃属植物未见报道。
菲类化合物(coelonin 和 lusianthridin)和联苄类化合物(gigantol、batatasin III )在兰科石斛属、石仙桃属和石豆兰属均有发现[66],如从石斛属植物Dendrobium scabrilingue 中均分离到 4 个化合物,与阳性对照阿卡波糖(acarbose,IC50 = 1076.4±30.6 μM)相比,化合物 coelonin,lusianthridin 和 gigantol 均表现出较强的-葡萄糖苷酶抑制活性,IC50值分别为 131.4±6.6 μM,112.9±5.3l μM和 103.1±0.8l μM[67];从石豆兰属植物中分离得到的 4 化合物与阳性对照顺铂(cisplatin)相比,lusianthridin 在体内和体外均具有很好的细胞毒活性,对 A549、人卵巢癌细胞 SK-OV-3 和人白血病细胞 HL-60 有较强的抑制作用[68],而化合物coelonin,gigantol 和 batatasin III 对人白血病细胞 K562 和 HL-60、人肺腺癌细胞A549、人肝癌细胞 Bel-7402 和人胃癌细胞 SGC-7901 表现出弱的细胞毒性[69, 70];从石仙桃属植物中分离得到的 lusianthridin,gigantol 和 batatasin III 在 3,10,30,100 μM 浓度下均无细胞毒性,而 coelonin 在 100 μM 浓度下具有一定的细胞毒性。另外,coelonin 体外抑制大鼠巨噬细胞 NO 释放活性(IC50 = 9.5 μM)和清除 DPPH自由基作用(IC50 = 6.9 μM)明显强于白藜芦醇(resveratrol,IC50 = 29.8, 21.2 μM),而 batatasin III 的 NO 释放活性(IC50 = 27.8 μM)和清除 DPPH 自由基作用(IC50 = 22.3 μM)与白藜芦醇相当[71]。该研究继续对节茎石仙桃的化学成分进行研究,将得到的微量单体化合物进行富集,为后期的生物活性研究提供物质保障。
第二章 HPLC 法测定节茎石仙桃氯仿部位中 3 个菲类和 2个联苄类化合物的含量
2.1 实验部分
2.1.2 样品采集与提取
该过程按“第一章 节茎石仙桃的化学成分研究”中“1.1.2 样品采集与提取”中的步骤进行。
2.1.3 五个单体化合物的分离纯化与结构鉴定
单体化合物详细的分离纯化与结构鉴定过程见“第一章 节茎石仙桃的化学成分研究”中“1.1.3 单体化合物分离纯化”和“1.1.5 化合物的结构鉴定”中化合物 1,5,6,9 和 10 的步骤。
2.1.4 样品溶液的制备
2.1.4.1 对照品溶液的制备
精密称定对照品化合物 flavidin(1),lusianthridin(5),coelonin(6),batatasin III(9)和 cirrhopetalidin(10)适量,用优级纯(GR)的甲醇溶解,并定容于10 mL 容量瓶中,使其浓度分别为 100、200、140、250 和 400 μg/m L,作为对照品储备液备用。再精密吸取化合物 1,5,6,9,10 的对照品储备液各 1.9 mL,置于 10 mL 容量瓶中定容,混匀,得到混合对照品溶液。
2.2 结果与讨论
目前,化合物 flavidin,lusianthridin,coelonin 和 batatasin III 在石仙桃属(Pholidota)[86, 99, 100]、石豆兰属(Bulbophyllum)[101, 102]、贝母兰属(Coelogyne)[103]、金石斛属(Flickingeria)[104, 105]、笋兰属(Thunia,无 flavidin)[106, 107]植物 中 都有 发现 ,但化 合 物 cirrhopetalidin 仅 在石 豆兰 属中的 梳 帽卷 瓣 兰( Cirrhopetalum andersonii 或 Bulbophyllum andersonii ) 和 带 叶 卷 瓣 兰(Bulbophyllum taeniophyllum)中分离得到[46, 108]。另外,这是我们首次建立一种HPLC-VWD 来快速分离 flavidin 和 cirrhopetalidin。同时,我们还用这种方法同时测定了节茎石仙桃 P. articulata、岩生石仙桃 P. rupestri、带叶卷瓣兰 B. taeniophyllum、藓叶卷瓣兰 B. retusiusculum、叉唇石斛 Dendrobium stuposum、叠鞘石斛 D. aurantiacum Rchb.f. var. denneanum、喉红石斛 D. christyanum、细茎石斛 D. moniliforme 中五个化合物的含量。其中 flavidin(1)在岩生石仙桃、带叶卷瓣兰、藓叶卷瓣兰和叠鞘石斛中均没有检测出;lusianthridin(5)和 coelonin(6)在藓叶卷瓣兰和叠鞘石斛中也没有检测到;batatasin III(9)仅在藓叶卷瓣兰没有发现;cirrhopetalidin(10)仅在节茎石仙桃和带叶卷瓣兰中检测到。因此,本研究为快速分离得到化合物(1,5,6,9,10)提供参考依据,为后期生物活性的研究奠定基础。
第三章 ICP-OES 法测定节茎石仙桃的根、茎、叶、花和果实中 16 种无机元素的含量 ............................ 22
前言 ........................................... 22
3.1. 实验部分 .............................. 24
3.1.1 实验设备与试剂 ................................. 24
3.1.2 样品采集与预处理 ............................. 24
第四章 毛兰属植物化学成分及生物活性的研究进展 ........................... 37
前言 ..................................... 37
4.1 化学成分 ............................... 38
4.1.1 菲类 ....................................... 38
4.1.2 甾体类 .................................. 40
4.1.3 联苄类 ............................... 42
第三章 ICP-OES 法测定节茎石仙桃的根、茎、叶、花和果实中 16 种无机元素的含量
3.1. 实验部分
3.1.1 实验设备与试剂
3.1.2 样品采集与预处理
节茎石仙桃于 2016 年 6 月采自云南省保山市龙陵县,由中国科学院昆明植物研究所刘恩德博士鉴定为兰科石仙桃属植物节茎石仙