引 言
胃癌患者的早期症状常常不明显，一部分患者就诊时就已经处于晚期，失去了行根治性手术治疗的机会，对于这部分患者化疗往往成为其治疗的主要方法。而这些胃癌患者在进行化疗的过程中，由于胃癌细胞出现的对于化疗药物不敏感、产生对化疗药物耐药以及对多种化疗药物耐药的现象，直接影响到患者的化疗效果及预后。
RNA干扰（RNA interference，RNAi）是由小分子双链RNA（doublestranded RNA，dsRNA）引发的转录后基因沉默现象，指向细胞导入与内源性mRNA编码区同源的dsRNA可使该mRNA发生降解而导致基因表达沉默。外源性RNA进入细胞后与一种具有dsRNA特异性的核酸内切酶Dicer（属于RNaseⅢ家族中，特异性识别双链RNA）结合形成酶-dsRNA复合物，随即被切割成21-23 nt大小的RNA片段，即小干扰RNA（smallinterference RNA，siRNA）。siRNA在细胞内多种酶作用下，可将靶mRNA完全降解。通过RNA干扰研究目的基因被沉默后发生的生理生化等方面变化，可以了解该基因的生物学功能。RNAi 技术当前作为一种具有革命性的基因转录后调控新技术，由于其特有的高效性和特异性，不仅成为基因功能研究的有力工具，还为特异性基因治疗提供了新的技术手段和应用前景，并日益成为后基因组时代基因功能和调控分析的有力工具。
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第一部分siRNA 抑制人胃癌 SGC7901 细胞中 ZNF139 表达及其对化疗药物敏感性影响的研究
前 言
胃癌是严峻威胁人类生命康健的重要疾病之一，当前已经成为环球庞大的大众卫生题目[1]。由于胃癌的早期症状不典范，当患者出现显着不适症状时，病情每每已经生长的较晚，失去了行根治性手术的时机，对付这部门患者，化疗成为其治疗的重要本领。固然比年来不停研究出新的化疗药物及革新的团结化疗方案，但胃癌患者的化疗结果仍旧不尽如人意。胃癌的多药耐药（multidrug resistance，MDR）每每是导致化疗治疗结果欠佳的重要缘故原由之一。MDR产生的机制较为庞大，并且受到多种因素影响，研究逆转MDR的有用要领已经成为进步化疗疗效的要害[2-3]。因此，怎样逆转胃癌的MDR，进步胃癌化疗疗效，成为当前胃癌研究中的热门，也是临床胃癌治疗中急待办理的题目。
RNA干扰（RNA interference，RNAi）是由小分子双链 RNA（doublestranded RNA，dsRNA）所引发的转录后基因沉默现象[4]。RNAi 技术作为一种具有革命性的基因转录后调控新技术，由于其特有的高效性和特异性，不仅成为基因功能研究的有力工具，还为特异性基因治疗提供了新的技术手段和应用前景，并日益成为后基因组时代基因功能和调控分析的有力工具。
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材料与方法
1 实验材料
1.1 研究对象
人胃癌细胞株 SGC7901 取自河北医科大学第四医院科研中心。该细胞培养于含 10%灭活胎牛血清，1×105IU/L 青霉素，1×105IU/L 链霉素，RPMI-1640 培养液中，置于 37℃，5%CO2恒温培养箱中培养。
1.2 主要实验仪器和设备
-80℃超低温冰柜 日本三洋公司
低温冰箱 青岛海尔公司
生物安全柜（BSC-15000IIA） 济南鑫贝西公司
双层恒温摇床 TS-1102C 型 上海天呈公司
漩涡震荡器 江苏其林贝尔仪器制造有限公司
低温超速离心机（TTICH-400） 德国 Heraeus 公司
立式高压蒸汽消毒器（MLS-3570 型） 日本三洋公司
电热恒温水浴箱ZD-420 杭州蓝天仪器有限公司
恒温磁力搅拌器（85-2B 型） 金坛市医疗仪器厂
倒置相差显微镜（TS100） 日本尼康公司
紫外可见光分光光度计U-2001型 日本日立公司
微量核酸蛋白检测仪 美国 Thermo 公司
PCR 扩增仪 美国 ABI 公司
ABI Prism 7500 型荧光定量 PCR 仪 美国 ABI 公司
酶标仪（2010 型） 奥地利 Thermo 公司
蛋白电泳仪（DYY-7C 型） 北京六一仪器厂
红外荧光扫描成像系统 美国Odyssey公司
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第二部分 siRNA 抑制人胃癌裸鼠原位移植瘤中 ZNF139 表达... 54-76
前言 ........................................54-55
材料与方法 ..................55-62
结果 ...................62-64
附图 ...........64-68
附表 ..........68-70
讨论 ..............70-71
小结.................. 71-73
参考文献............................... 73-76
第三部分 siRNA 抑制人胃癌 SGC7901 细胞...76-100
前言.............................. 76-77
材料与方法 ........................77-83
结果 ............83-85
附图 .............85-91
附表 .........................91-93
讨论 ...................93-96
小结 ...........................96-97
参考文献 .............................97-100
第四部分 siRNA-ZNF139对人胃癌SGC7901细胞及其裸鼠原位移植瘤中 PDXK、ANXA2 及 Fascin 表达影响的研究
前 言
卵白质组学（proteomics）现在已经成为生命科学研究范畴的前沿。卵白质组学及其相干技能因此基因编码的全部卵白质组为研究工具，从团体的角度上阐发细胞内动态变革的卵白质的构成成份、表达程度与修饰状态，相识卵白质之间的相互作用与接洽，展现卵白质功效与细胞生命运动纪律，研究生物体的生理生化及病理历程。其焦点内容便是依赖双向荧光差别凝胶电泳（2D-DIGE）分散差别卵白，然后以质谱技能（MS）技能和生物信息学（Bioinformatics）要领判定阐发分散出来的卵白质。卵白质组学技能以其高敏捷度、高正确性、高通量的特点被遍及应用于生物学各个范畴，而对肿瘤的卵白质组学研究已经成为比年来肿瘤临床研究中的热门。现在，通过卵白质组学技能已经发明了多种与胃癌产生、生长及多药耐药等相干的卵白[1-2]。
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结 论
本实验研究以人胃癌 SGC7901 细胞及其裸鼠原位移植瘤为研究对象，应用 qRT-PCR、Western blot、MTT 法及蛋白质组学技术，检测各实验组中 ZNF139 mRNA 及蛋白的表达情况，对化疗药物敏感性的变化，及差异蛋白的表达情况，探讨 siRNA 抑制人胃癌 SGC7901 细胞及其裸鼠原位移植瘤中 ZNF139 表达及其蛋白质组学变化，旨在为研究 ZNF139 参与胃癌发生、发展及多药耐药的机制，寻求逆转胃癌多药耐药的新方法，提高胃癌化疗疗效提供理论基础。
1 siRNA 能够抑制人胃癌 SGC7901 细胞及其裸鼠原位移植瘤中ZNF139 mRNA 的表达。
2 siRNA 能够抑制人胃癌 SGC7901 细胞及其裸鼠原位移植瘤中ZNF139 蛋白的表达
3 siRNA 抑制人胃癌 SGC7901 细胞及其裸鼠原位移植瘤中 ZNF139的表达能够提高胃癌细胞对于化疗药物的敏感性。
4 siRNA-ZNF139 能够抑制人胃癌裸鼠原位移植瘤的生长。
5 在 siRNA-ZNF139 转染后的人胃癌 SGC7901 细胞中 PDXK、Desmin 、 NPM 表达上调， HSP70 、 ANXA2 、 Fascin 表达下调。在siRNA-ZNF139 转染后的人胃癌裸鼠原位移植瘤中 ANXA1、PDXK 表达上调，Fascin、ANXA2、hnRNP 表达下调。
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参考文献（略）
