第一章文献综述
1.1肿痛及其治疗现状
恶性肿瘤也称作癌症（Cancer)，是严重威胁人类健康与生存的疾病，亦是引起人类死亡的主要原因之一。根据世界卫生组织的报告，在2012年，全球新增癌症患者1400万人，癌症死亡人数高达820万。其中，非洲、亚洲和中南美洲的发展中国家受癌症影响最大。随着工业化的程度加深，各种生活环境的污染、工作压力的增大等等因素，中国2012年新发肿瘤人数达312万例（是美国的2倍），占全球总数的21.8%，平均每天8550人，全国每分钟有6人被诊断为癌症。全国肿瘤死亡率为180.54/10万，每年因癌症死亡病例达270万例，占到全球癌症死亡人数的26.9%。恶性胖瘤已成为我国居民死亡的首要原因。因此，恶性肿瘤的预防与治疗在我国就具有非常重要的意义。图1.1为2012年中国常见癌症的发生率。
目前治疗癌症的手段依然是手术治疗，放射治疗以及化学治疗等。手术治疗，适用于癌症早期时癌组织较小且还未转移的病人。放射治疗简称放疗，它是将一种高能电磁辐射线作用于生命体，使其生物分子结构改变，从而达到破坏癌细胞目的的一种治疗方法。目前临床上应用的两种放射线有X射线治疗和Y射线治疗。化学疗法⑴是将药物通过静脉给药，经过血液循环，对各个可能存在的肿瘤病杜进行系统治疗。然而，目前在临床治疗中使用的化疗药物一方面分布选择性低，造成药物广泛分布于全身各组织器官，极大地影响了药物利用度。另一方面还对正常组织和器官造成显著的毒副作用，长期用药，对肝肾损伤很大。除此之外，长期使用化疗药物难免造成肿瘤细胞对该化疗药物产生多药耐药性（MDR)使得敏感性降低，使用剖量增大，毒副作用也随之增大，从而增加后期治疗的困难。所以，提高化疗药物对脾瘤组织的特异乾向，降低药物在正常组织的分布，减小毒副作用和提高药物利用度是解决抗肿瘤药物疗效的关鍵。
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1.2纳米药物输送体系
1.2.1抗肿播药物的被动乾向
正常构造中的血管内皮细胞间隙致密、布局完备，大分子和纳米颗粒不易透过血管壁。毛细血管是血液中的氧气、营养物质和体内细胞孕育发生代谢物和二氧化碳举行互换的场合，其管壁极薄，管径约8 ^im,仅容许单个红细胞通过。毛细血管壁一样通常由一层内皮细胞和基膜构成。较细的毛细血管截面可见单个内皮细胞，而较粗的毛细血管由2?3个内皮细胞围成。在内皮细胞和基膜之间另有一层散装漫衍的扁平而有突起的细胞，功效不详。凭据毛细血管在差另外器官和构造中，其内皮细胞分列方法的差别，而可将其分为一连毛细血管、有孔毛细血管以及血窦。
而肿瘤组织中血管丰富、血管壁间隙较宽、结构完整性差，淋巴回流缺失，造成大分子或者纳米颗粒输送载体在此处具有高通透性和滞留性，这种现象被称作实体瘤的高通透性和滞留效应，简称EPR效应[19]，如图1.2所示。研究证明EPR效应是一种特殊的性质，它能够使大分子或者纳来药物在很大程度上提高其被动乾向性,进而提高药物疗效在疏水性药物通过EPR效应到达肿瘤部位的过程中，为了使得纳米载体不被免疫系统识别并被快速清除，在血液中达到长时间循环的效果，通常要求纳米载体至少要具备以下两个特点：一是具有合适的纳米尺寸，因为肿瘤血管的孔径在400 nm以下，要求纳米颗粒的尺寸必须要小于400 nm以便进入肿瘤组织。肾脏会过滤小于10 nm (大约70kDa)的分子，肝脏会主动清除掉大于100 mn的的纳米颗粒。所以一个合适的纳米颗粒尺寸应在10-100nm之间。二是纳米颗粒表面性质，如表面电荷等，血液中的无机离子会主动结合带正电荷的纳米颗粒，使之很快被肾脏清除，肾脏会特异性过滤表面电位为正电荷的纳米颗粒，所以保持其表面电荷为中性或者少量的负电荷有利于获得更长时间的血液循环[24]。此外，用含有亲水性的表层对纳来颗粒进行修饰，最常见的是聚乙二醇（PEG)，它是目前得到美国食品和药物管理局（FDA)批准可用于人体的微粒表面修饰的最常用材料。它可以有效地减少体内巨嗟细胞的吞唾、逃避网状内皮系统（RES)的清除，显著延长纳米颗粒在体内的循环时间。纳米颗粒的组成、表面的PEG相对分子质量、包衣厚度及密度、纳米颗粒的形态等都可以影响其在体内的循环时间[25]。如PEGsk或PEGzok修饰的聚乳酸纳来颗粒衣层厚度分别约为4.3 nm和7.8 nm,前者能更有效地避免肝脏中巨唾细胞的吞唾，二者的效果均优于泊洛沙姆188[26]。PEG修饰时，纳来颗粒的粒径会影响PEG链的柔初性，较小的粒径往往对应较强的链活动性和柔初性，因而不易被吞唾细胞识别。Calvo等[27]发现，PEG修饰的纳米颗粒PHDCA能透过血脑屏障，增加其脑内的浓度而不影响血脑屏障的通透性，从而延长纳米颗粒的体内循环时间，同时提高药物的脑乾向性。因此，需要对纳来颗粒表面、尺寸等进行合理的设计，才可以控制纳米颗粒在体内获得长循环，从而使更多药物进入肿瘤组织，减少非觀向组织对载药纳米颗粒的摄取。目前，这种被动乾向的纳米药物载体已经有应用临床的药物输送，最具代表性的是Doxil (负载阿葛素的聚乙二醇化脂质体)和Abraxane (白蛋白结合型紫杉醇纳来颗粒尸]，已经被FDA批准应用于临床的纳米药物，它们能够显著提高药物的体内循环时间，并且具有良好的觀向性，较低的毒副作用，现被用于治疗转移性乳腺癌等各种肿瘤。表1列举了这类已经进入临床或正在进入临床的纳米药物。
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第二章两亲性嵌段共聚物的合成与表征
近年来，纳米药物在肿瘤乾向治疗的应用受到了越来越多的存眷。纳米药物可以增长药物到达肿瘤部位的比例，大猛进步疗效和低落了药物对正常构造毒副作用。此中，聚合物胶束作为抗肿瘤药物的载体具有其奇特的上风，药物可以通过简朴的物理包埋、静电作用或共价键键合要领载入聚合物胶束。然而，胶束作为药物载体的一个重要缺点是其在血液中的稳固性差它明显影响药物的构造漫衍、肿瘤部位的积蓄和抗肿瘤活性。当胶束载药体系通过静脉注射到生物体后，由于血液循环中不停的稀释以及与血液中的卵白等相互作用，胶束会渐渐散开。
在生物可降解两亲性共聚物的研究中，聚乙二醇（PEG)是具有生物相容性的非离子水溶性聚合物，常用于组成其中的亲水链段。聚己内醋（PCL)有良好的生物相容性、无毒性，在药物控制释放等领域得到广泛应用和研究，比PLA和PGA等疏水性更强，生物降解速度更慢，我们选用其为两亲性共聚物的疏水链段。基于PEG-PCL的两亲性嵌段共聚物作为胶束载药的研究较多，如FeiWang等.研究了星型PEG-PCL共聚物的载药性能Kim等用两亲性二嵌段共聚物PEG-PCL包载紫杉醇制备载药胶束[129]。但是，一般的载药胶束也有其不足：（1)低的生物利用率，肌体内循环半衰期不长，容易受到蛋白吸附，从而被网状内皮系统快速识别并摄取，随后被肝或肾清除，不能发挥最佳疗效。（2)在生理条件下，载药胶束不是很稳定，容易受各种因素影响而解体，造成突释，不能长时间维持一个稳定有效的药物浓度。
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2.1材料和方法
2.1.1药品及试剂
s-己内醋经氧化韩回流除水后减压蒸傭，充氮气密封备用。三乙胺、二氣甲+燒均用氧化转回流除水，使用前蒸出。四氢味喘经过纳钟合金回流除水，使用前蒸出。OiBr用稀醋酸反复浸泡至上层清液为无色，过滤除去稀醋酸，用丙酮反复洗漆，抽滤，将滤得的CuBr在室温下真空干燥，避光保存备用。未经说明的其他试剂直接使用。
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第三章 两亲性共聚物载体的体外稳定性研究 ...................68-85
3.1 材料和方法 ...........................68-75
3.1.1 药品及试剂 ....................68-69
3.1.2 实验仪器 .................................69
3.1.3 细胞培养 .............................................69
3.1.4 FRET效率与I_(640/680)、I_(640/720)强度以及micelle%之间的换算 ...........69-70
3.1.5 FRET光谱成像以及光谱成像显微技术 .....................70
3.1.6 血液中剪切应力作用对药物输送的影响 ........................70-73
3.1.7 共聚物胶束的溶血测定.................... 73-75
3.1.8 共聚物胶束在不同介质中稳定性的测定 .....................75
3.1.9 共聚物胶束在细胞中稳定性的测定 .....................75
3.2 结果与讨论 ..........................75-84
3.2.1 FRET效率与I_(640/680)、I_(640/720)强度以及micelle%之间的换算 ........75-76
3.2.2 血液中剪切应力作用对药物输送的影响 ................76-77
3.2.3 共聚物胶束的溶血研究 ............................77-78
3.2.4 共聚物胶束在不同介质中稳定性的测定
