引言
围绝经期骨质疏松症是妇女在围绝经期由于雌激素低下导致骨量低下，骨结构破坏，导致骨脆性增加，易发生骨折特征的全身性骨病。围绝经期骨质疏松症属于原发性疾病，中医药在治疗方面具有明显的优势，治疗该疾病的中药复方不断被运用临床上。当归补血汤作为金元四大家之一李东垣的经典方，经过细胞活性筛选组合成新的中药复方，并经过MG一63、MCF一7细胞实验的验证，证实其具有雌激素样作用和促进成骨细胞增殖和分化的作用，为该衍生方(丽安康)治疗围绝经期骨质疏松症奠定微观实验依据。但是对于该方的工艺制备研究、有效成分的控制方法以及整体动物药理研究仍为空白。鉴于此，本研究对该衍生方进行药学的制备工艺、质量标准和药理研究，通过系统的研究方法对该衍生方进行工艺优化，建立起该方的质量标准，为药理研究奠定药学的基础;最后，通过在体动物实验验证其药理功效，并结合细胞实验研究和揭示其作用机理。
首先，在于药学研究部分，本研究根据前期研究的结果进行工艺的改进和指标成分的监控分析。前期研究结果表明，其有效成分主要以黄蔑甲昔、淫羊蕾昔、阿魏酸等代表的有效成分群。一方面，本研究在遵循中医药理论指导和前期的研究结果，以前期确定的配方和比例为基础，严格按照上述的相关有效成分成为考察指标，进行正交试验研究。鉴于目前黄茂甲昔、淫羊蕾昔、阿魏酸等测定方法未能确保运用与该复方的可行性与准确性，本研究进行新的检测方法的探索，通过三个指标成分的化学性质和紫外吸收特点建立新检测方法，保证检测方法的准确性和可行性。
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第一部分文献研究
第一章围绝经期骨质疏松症的发病原理
本章节对围绝经期骨质疏松症的西方医学研究和中医药研究举行综述，以明白该疾病的医疗环境，从两个差另外角度探究疾病的素质和治疗依据。
第一节骨质疏松症的西方医学研究
围绝经骨质疏松症主要发生在围绝经期的妇女，由于雌激素缺乏导致骨量减少及骨组织结构变化，使骨脆性增高易于骨折。与增龄性骨质疏松不同的是松骨质变化显著，常见脊椎骨折与腕骨骨折，而65岁以后骸骨骨折增多。1941年，Albrightll]观察到绝经与骨质疏松的联系，并提出绝经后骨质疏松症的概念，认为绝经后雌激素缺乏(estrogendeificiency)是发病的首要因素。骨质疏松症(ostcoporosis，oP)以骨量减少，骨的微观结构退化为特征的，致使骨的脆性增加，以及易发生骨折的一种全身性骨骼疾病。该病是常见的代谢性骨病，多见于绝经期妇女，男子骨质疏松症的发生率仅为妇女的1/6。国际骨质疏松基金会的统计数据显示，骨质疏松症目前危害着全球大约1/350岁以上的女性和1/550岁以上的男性，已成为一个全球性的公共卫生问题。随着世界人口的增加和平均寿命的提高，这种疾病的威胁也越来越大。伴随人口老龄化进程的加快，预计日本骨质疏松症患者将超过1000万人。骨质疏松患者很易发生骨折，在一般外力作用下，即可导致骨折。绝经后妇女发生骨质疏松症与内源性雌激素有关。雌激素的减少，对破骨细胞的抑制作用减弱，破骨细胞相对增加，破骨与成骨明显失衡，出现骨的吸收增加和骨的形成减少，导致骨质逐渐丢失。
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第二章围绝经期骨质疏松症的治疗和中药方剂现状
本章节从治疗围绝经期骨质疏松症的药物进行综述，通过梳理现有的药物，明确现有药物的治疗方向和动态。
第一节围绝经期骨质疏松症的治疗现状
一、西医药物治疗
1.抗骨代谢药
雌激素和双麟酸盐作用机理:淘汰破骨细胞的孕育发生(雌激素类)和低落破骨细胞的活性(双磷酸盐类)，促进破骨细胞的凋亡，进而克制骨吸取和骨重修空间。减缓骨吸取，维持骨量，不克不及高效的刺激骨形成和增长骨量。
1.1雌激素(Estrogens)和选择性雌激素受体调节剂
雌激素替代治疗长期被认为预防女性骨质疏松症的一线治疗药物引。其作用机制:第一，雌激素阻止骨代谢单位，如生长因子和白细胞介素的激活。白细胞介素6(IL一6)是骨吸收的高效的刺激剂，雌激素抑制破骨细胞的IL一6的合成，阻断IL一6受体;第二，雌激素增加破骨细胞凋亡;第三，雌激素延缓PTH的骨吸收效应。因此，雌激素能抑制骨吸收，降低骨转换，而增加BMD。但是雌激素对骨重建过程起调节作用，绝经后妇女由于雌激素缺乏而导致骨质吸收增加，特别是小梁骨吸收加速。超过骨合成的增长，造成骨合成和吸收之间的失衡，结果骨质减少，破坏骨小梁微小结构的完整性，骨骼承受正常压力的功能减弱，因此即使轻度创伤也可导致骨折。补充雌激素抑制骨高转换，降低骨重建的激活速度，雌激素可调节每个重建周期中吸收和合成之间的平衡，使骨质在短时间内增加尤其是高度转动的部位(如脊柱)，并继续减少骨质的损失，据报道绝经后立即使用雌激素可使妇女骨质减少延迟约5年，同时也相应地延迟骨质疏松的发生，然而只有在持续使用时才有效，终止用药后立即出现骨质损失。有人给70岁以上妇女仅短期使用雌激素(少于5年)同时对骨骼状态评估，结果证实雌激素效果不持久，因此，必需长时间应用雌激素，甚至终身使用。然而，雌激素除了作用于骨外，还强烈的刺激其他组织，如:乳房和子宫，引起乳房癌和子宫出血。研究表明，接受单用雌激素替代治疗5年以上的妇女，其乳腺癌的发生率约增加20%，此外，服药后常见恶心，食欲不振，还可引起子宫内膜过度增生及子宫出血。因此，在美国和其他国家，其副作用已限制了雌激素的长期应用。
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第二部分 实验研究 .....................................44-129
第一章 丽安康剂的工艺研究和质量控制研究 ..................44-75
第一节 丽安康的提取工艺研究 ...........................44-58
第二节 丽安康片剂的质量控制研究 ......................58-74
第三节 小结 ...................................74-75
第二章 丽安康剂治疗围绝经期骨质疏松症的药理毒理研究
围绝经期综合征是妇科常见病、多发病，是在围绝经期出现性激素减少为主的神经内分泌、心理和代谢变化所致的各器官的症状和体征的症候群，常见症状有潮热、潮红、精神状态的变化、心血管系统与生殖泌尿系统的病变及骨质疏松等。因此，治疗围绝经期综合征的药物的药效评价主要包括神经、内分泌、代谢、免疫功能四方面。
第一节丽安康治疗围绝经期骨质疏松症的药理研究
一、试验材料
1.供试品
丽安康提取物:广州中医药大学新药开发研究中心提供，批号20071201。提取物1g约相当于原生药3.99，阴凉干燥条件下密闭保存。
2.阳性对照药
倍美力(PREMA田N)片:0.625m留片，爱尔兰惠氏药厂生产，批号071207。加蒸馏水配制成10.42p乡mL的混悬液，超声分散，每次给药前摇匀。
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结语
本课题的研究思路为对符合围绝经期骨质疏松症的指标成分和药理毒理作用进行研究。本研究的设计遵循中医药的特点，并以前期细胞活性结果为前提，对该复方的研究进行深入提取工艺、质量控制和药效作用、靶器官毒理作用研究。本研究从该方的提取工艺入手，遵循该方药味的比例配伍和提取方法的基础上，以指标成分转移率和总固物提取率作为考察指标，优化提取工艺并探索影响因素的规律性;然后，对成型的工艺进行辅料筛选，确保后续各种实验研究的重现性。运用中医药“以阴为体，以阳为用”的理论特点，以脏器形态和相关功能测定为实际操作指标。通过两个动物模型进行对比药效学的验证，从内分泌和脏器等5类指标的对比，研究对围绝经期的内分泌调节作用和改善骨骼组织作用;最后，对于其生殖器官进行毒性研究。总而言之，本研究从药学和药理学进行全面的分析研究，通过上述的实验，本研究得出以下结论:
1.从工艺研究和质量研究结果可知，丽安康的最佳工艺为:当归、黄茂加8倍量水煎煮3次，每次1.5小时，滤过滤液浓缩至相对密度为1.35一1.40(60℃)，微波干燥，粉碎成细粉。另取淫羊蕾，用14倍量70%乙醇提取二次，每次1小时，滤过，滤液合并，减压回收乙醇，减压浓缩成相对密度为1.20(50℃)的清膏，干燥，粉碎成细粉，备用。将两种膏粉及适量的巧%聚维酮乙醇溶液、交联聚维酮、微晶纤维素，混匀，加入适量微晶纤维素，制成颗粒，压片。该实验结果显示，丽安康的提取方法具有最有效保留指标成分的特点，以黄茂甲昔、淫羊蕾昔为主要的考察指标能够确保前期细胞实验有效成分的转移率。对于不同指标成分，温度、溶媒、提取时间对其含量有显著影响:对于黄蔑当归共煎工艺，影响因素的顺序为A(加水量)>C(提取次数)>B(提取时间)>D(干燥温度);而对于淫羊蕾醇提工艺，影响因素的顺序为A(乙醇浓度)>D(提取次数)>B(加乙醇量)>C(提取时间)。课题通过探索性研究，建立黄茂甲昔的柱前衍生研究方法，将黄蔑甲昔的吸收波长从203nln蓝移至230nln，操作法方较以往的简便，确保该方的含量测定准确。同时本研究根据阿魏酸、淫羊蕾昔的化学性质，首次建立对阿魏酸、淫羊蕾昔的同步含量测定方法，为该方指标成分的含量测定进行简洁的测定方法。各指标成分的转移率为79%以上，在一定程度上符合保留细胞实验的成分要求。为后续的药理毒理验证研究奠定了基础。
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参考文献（略）
