【摘要】帮写论文目的:研究犬乳恒牙替换过程中IL-6在组织中的表达情况,分析IL-6在乳恒牙替换过程中可能发挥的作用。方法:应用免疫组织化学及半定量分析的方法检测IL-6在成年犬和幼犬替牙期的表达。结果:成年犬IL-6的表达呈阴性;幼犬替牙期的乳牙成牙本质细胞层、牙周膜和恒牙胚上方骨组织中均有阳性信号表达。结论:提示IL-6可能在幼犬乳牙替换过程中发挥着一定的作用。
【关键词】乳恒牙替换;白介素-6;免疫组织化学
在乳恒牙替换过程中,恒牙要破骨萌出,必然会引起牙槽骨和乳牙根的吸收。IL-6是目前发现的最强骨吸收因子,对牙槽骨的吸收起重要的促进作用,但它是否对乳牙根生理性吸收同样也有着促进作用,既往学者有过类似的推测,但迄今为止仍缺乏明确的证据。本实验应用免疫组织化学及半定量分析的方法,观察成年犬和幼犬乳牙替换期IL-6的表达情况,分析IL-6在乳恒牙替换过程中可能发挥的作用。
1 材料和方法
1.1 实验动物
选用恒牙根发育完成的本地产成年杂种犬2只为对照组;替牙期的幼犬2只为实验组。对犬定期拍X片,依据根吸收情况,分为吸收1/2、3/4两组。
1.2 标本制备
分期处死,40 g/L多聚甲醛颈动脉灌注内固定,按照根吸收情况分别取材,置于40 g/L多聚甲醛液,进一步固定24h。4℃下甲酸甲酸钠溶液脱钙7周,常规脱水,石蜡包埋,连续作5μm冠状切片。
1.3 免疫组化染色
采用SABC法染色,小鼠抗人IL-6单克隆抗体由第四军医大学免疫教研室提供,SABC免疫组化染色试剂盒为博士德公司产品,以不加一抗的为阴性对照。
1.4 免疫组化结果半定量分析
采用武汉千屏公司生产的图像分析仪分析所有组织切片,用于分析的IL-6的免疫组化染色组织切片是在同一条件下一次完成。
使用第四军医大学统计教研室的统计软件SPLM对数据进行方差分析,数据以-x±s表示。
2 结果
2.1 免疫组化观察结果
2.1.1 成年犬组
牙髓、牙体以及牙周组织染色均阴性。
2.1.2 幼犬乳牙根吸收1/2组
乳牙牙髓成牙本质细胞层阳性(图1,见彩插),被吸收的乳牙根呈蚕食状,吸收陷窝内有阳性的破骨细胞(图2,见彩插),牙周纤维呈一黄褐色的强阳性带(图3,见彩插),恒牙胚的上方骨组织中可见有明显的阳性破骨细胞(图4,见彩插)。
2.1.3 根吸收3/4组
随着乳牙根吸收接近完成,各部位的表达逐渐减弱甚至消失。
2.2 免疫组化图像分析结果
3 讨论
幼犬乳牙根吸收组和恒牙牙根发育完成的成年犬组比较,结果显示:幼犬根吸收组的恒牙胚上方的骨组织和乳牙吸收组织均有不同程度的阳性表达;而未发生骨和牙根吸收的成年犬组染色呈阴性,提示IL-6可能与乳牙根吸收有关。
目前的研究表明:IL-6能引导破骨细胞分化因子的表达,诱导破骨细胞前体的募集,促进破骨细胞的形成、增值、分化[1], IL-6是骨的调节因子之一。有学者在根尖周囊肿的培养液中检测到大量高活性的IL-1、IL-6,认为IL-1、IL-6是根尖囊肿主要的溶骨因子[2,3]; Miyata等[4]研究显示,牙龈卟啉菌脂多糖通过CD14产生IL-1、IL-6引起牙槽骨吸收,CD14抗体可以抑制IL-6的表达,抗IL-6可明显抑制骨吸收。袁林的研究显示,在牙合力影响下,IL-6通过自分泌和旁分泌的方式参与牙周组织的改建[5]。在乳恒牙替换过程中,恒牙胚要牙合向萌出,必然会引起牙槽骨和乳牙根的吸收,破骨细胞是引起二者吸收的唯一功能性细胞,本组发现幼犬根吸收组中乳牙残根吸收陷窝和恒牙胚上方的骨组织中阳性破骨细胞表达证实了这一点。
本组研究显示幼犬根吸收组的乳牙牙周膜IL-6的表达阳性。以往的资料证明乳牙牙周组织细胞可以调节牙根的吸收,但这种调节作用是通过牙周成纤维细胞分泌的蛋白酶和某些抑制因子以及一些尚不知名的可影响破骨细胞发生的因子,其中IL-1和TNF-α可以提高蛋白酶的表达,不提高某些抑制因子的表达[6],本实验幼犬根吸收组乳牙牙周膜IL-6的阳性表达更加充实了这一观点。另外,实验中还发现乳牙成牙本质细胞层也呈阳性表达,它客观上提高了IL-6的局部浓度,有利于吸收。
幼犬根吸收1/2组和3/4组比较,可以明显的看出,根吸收1/2组IL-6各个部位的阳性表达均强于根吸收3/4组,并且有显著的统计学差异。说明随着根吸收的完成,IL-6的表达在逐渐减弱,推测IL-6可能与乳牙根的吸收程度有关系。
【参考文献】
[1] Ishimi Y, Miyaura C, Jin CH.IL-6 is produced by osteoblasts andinduces bone resorption [J].JImmunol,1990,145(10):3297
[2] Meghji S, Henderson B, Bando Y,et al.Interleukin-1:the princi-pal osteolytic cytokine produced by keratocysts[J].Arch Oral Biol,1992,37(11):935
[3] Bando Y,Henderson B,Meghji S,et al.Immunocytochemical local-ization of inflammatory cytokines and vascular adhesion receptors inradicular cysts[J].J Oral Pathol Med,1993,22(5):221
[4] http://www.51lunwen.org/Miyata Y,Takeda H, Kitano S,et al. Porphyromonas gingivalislipopolysaccharide- stimulated bone resorption via CD14 is inhibit-ed by broad-spectrum antibiotics[J].Infect Immun,1997,65(9):3513
[5] 袁林,周伟东,赵云凤,等.牙合力增强对大鼠牙周组织IL-6mRNA表达影响的研究[J].牙体牙髓牙周病学杂志,2001,11(3):16
[6] Wu YM, Richards DW, http://www.51lunwen.org/Rowe DJ.Production of matrix-degradingenzymes and inhibition of osteoclast-like cell differentiation by fi-broblast-like cells from the periodontal ligament of human primaryteeth[J].JDent Res, 1999,78(2):681
