Abstract: objective: to study the stomach a signet ring cell carcinoma of the occurrence and the proliferation of the glands in the relationship, and discussed its cell origin and pre-cancerous. Methods: 42 patients with early stomach a signet ring cell carcinoma as the research object, the organization form observation, the immunohistochemical double dye mark carcinoma in the kitchen MUC5AC and MUC6 differentiation markers expression, detection carcinoma different regional focal Ki-67 and gastrointestinal dry/progenitor cells musashi markers of expression differences-1, and the comparison with cancer glands in. The result: early stomach a signet ring cell carcinoma has distinctive layered structure.This structure is divided into two layers, JianBiaoCeng is typical of a signet ring cell, big volume and the cytoplasm of the rich, the basal layer for the primitive of cancer cells, small volume, nuclear/plasma than big; In form and anatomic localization, the cancer and the basal carcinoma cells similar to the proliferation glands in the area, immunohistochemical show the MUC5AC, MUC6 expression are negative, or only a faint MUC5AC expression, and Ki-67, musashi-1 expression rate was significantly higher than JianBiaoCeng seal ring cell (t = 31.0 and 22.8, P < 0.01);Base layer to the cancer cells JianBiaoCeng signet ring cell differentiation transition, this and proliferation of cells to stomach area small concave epithelial differentiation process is similar; The cancer cell proliferation glands in the visible region hyperplasia, its phenotype and layered structure basal cancer cells are consistent.Conclusion: the stomach seal ring cell carcinoma may be originated in proliferation area MUC5AC-/ lowMUC6-stomach small concave the progenitor cells, at the same time, the hyperplasia is such proliferation of cancer of the stomach precancerous lesions.
Key words: the stomach cancer; A signet ring cell carcinoma; Cancerous tumors; immunohistochemical
摘要：目的:研究胃印戒细胞癌的发生与胃腺增殖区的关系,探讨其细胞起源和癌前病变.方法:以42例早期胃印戒细胞癌为研究对象,观测其组织形态,采用免疫组织化学双染标记癌灶内分化标志物MUC5AC和MUC6的表达情况,检测癌灶不同区域Ki-67以及胃肠道干/祖细胞标志物musashi-1的表达差异,并与癌旁胃腺进行对比.结果:早期胃印戒细胞癌具有特征性的分层结构.该结构分为两层,浅表层为典型的印戒细胞,体积大,胞质丰富,基底层为原始的癌细胞,体积小,核/浆比大;在形态和解剖定位上,基底层癌细胞与癌旁胃腺增殖区细胞类似,免疫组织化学显示其MUC5AC、MUC6表达均为阴性,或仅微弱表达MUC5AC,而Ki-67、musashi-1表达率显著高于浅表层印戒细胞(t=31.0和22.8,P<0.01);基底层癌细胞可向浅表层印戒细胞分化过渡,这与增殖区细胞向胃小凹上皮分化的过程相似;癌旁可见胃腺增殖区细胞异型增生,其表型与分层结构基底层癌细胞一致.结论:胃印戒细胞癌可能起源于增殖区MUC5AC-/lowMUC6-的胃小凹前体细胞,同时增殖区的异型增生是此类胃癌的癌前病变.
关键词:胃肿瘤;印戒细胞癌;肿瘤发生;免疫组织化学
0引言
基于临床病理特征的不同,胃癌可分为肠型和弥漫型两类[1].近年的流行病学调查显示,胃癌的总体发病率已明显下降[2],但弥漫型胃癌尤其是印戒细胞癌的发病率却显著升高[3],因此这类胃癌也受到越来越多的关注.迄今,胃印戒细胞癌的早期诊断率不高,一个重要原因是对此类胃癌的病理形成机制和癌前病变尚不清楚.胃印戒细胞癌与肠型胃癌相似,起源于胃黏膜上皮.组织学上,胃黏膜的基本结构单位是胃单元(gastricunits),该结构为单克隆起源[4],由胃小凹和胃腺组成,其中胃腺又依次分为峡部、腺颈和基底部.胃腺的峡部以及腺颈上部的细胞增殖活跃,被称为增殖区.研究证实,增殖区是胃印戒细胞癌起源的部位[5].然而,这一区域实际上含有多种低分化细胞,并具有不同分化方向[6,7],印戒细胞癌究竟起源于增殖区的何种细胞,目前尚不清楚.为探讨这一问题,本研究以早期胃印戒细胞癌为观测模型,采用免疫组织化学双染的方法,观测了早期肿瘤细胞的空间分布、分化表型和增殖特性,希望为认识此类肿瘤的细胞起源及其癌前病变提供新的病理学依据.
1材料和方法
1.1材料回顾我院1988-2008年以及无锡市第三人民医院2007-2008年手术切除的胃癌根治标本约2 200例,根据最新WHO国际肿瘤病理分类对胃印戒细胞癌的病理诊断标准(印戒细胞占癌细胞总数的50%以上),以及早期胃癌的诊断标准(癌细胞浸润深度不超过黏膜下层),共确认42例早期印戒细胞癌标本作为研究对象,患者年龄30-77岁,其中男25例,女17例,均无家族史;肿瘤分期:24例为T1a期,局限于黏膜内;18例为T1b期,累及黏膜下层.对所有标本的存档蜡块连续切片(厚3μm),苏木精-伊红(HE)染色.另取10例正常胃黏膜作为对照.
1.2方法
1.2.1免疫组织化学染色:采用免疫组织化学双染标记MUC5AC和MUC6阳性细胞,其中MUC5AC主要表达于胃小凹、峡部和腺颈部的黏液细胞[8](抗体购自福州迈新公司,为工作液),MUC6则局限于腺颈的黏液细胞和基底部的幽门腺上皮[8](浓缩抗体购自上海长岛公司,稀释度1∶50),此二者常被用来作为胃上皮分化的标志物.操作按产品说明书进行,并根据文献略有改变[9],步骤简述如下:石蜡切片脱蜡至水;柠檬酸缓冲液(pH6.0)95℃修复10 min,保温10 min;3%H2O2室温孵育后血清封闭10 min;而后采用SP法先标记MUC6,显色系统为BCIP/NBT,阳性呈蓝黑色,定位于细胞质;随后再次进行抗原修复,目的为暴露MUC5AC抗原,同时灭活前一次染色时残留抗体的免疫活性,抗原修复方法同前.采用SP法标记MUC5AC,显色系统为HRP/AEC,阳性部位呈红色,定位于细胞质.另取连续切片单独标记Ki-67(抗体购自福州迈新公司,为工作液)和musashi-1(Santa Cruz公司,浓缩液,稀释度1∶100),其中musashi-1为一类RNA结合蛋白,与干细胞的不对称分裂有关[10],是神经干细胞和胃肠道干/祖细胞的标志物[11-13].染色仍采用SP法,显色系统为HRP/DAB,阳性部位呈棕黄色,定位于细胞核.阴性对照采用PBS替代一抗与切片孵育,其余操作相同.
1.2.2不同区域印戒细胞平均Ki-67、musashi-1阳性细胞比例的测定及比较:免疫组织化学染色标记Ki-67、musashi-1后,检测不同区域阳性癌细胞的比率.每例标本测定两个区域:癌灶靠近黏膜表面上皮的浅表部分和浸润最深的 部位.每个区域随机选取5个视野,计数Ki-67、musashi-1表达呈阳
