本文是一篇护理论文研究，本研究以循证护理理论为基础，结合文献中压力性损伤的证据，考虑压力性损伤护理临床实践现况，以探索与改进现有护理临床实践证据。
第一部分 深部组织压力性损伤组织中铁含量测定材料与方法
1 实验材料
1.1 实验仪器
2 实验方法
2.1 深部组织压力性损伤模型的构建及评估
根据文献[43, 44]，构建小鼠深部组织压力性损伤模型。将小鼠置于洁净的工作台上，固定头部及腿部，操作者用剃毛器剪去小鼠背部及腹部的毛发，适量脱毛膏涂抹于小鼠背部及腹部，用温蒸馏水冲洗，擦干。在小鼠坐骨棘突的背部和腹部两侧使用磁铁（直径 12mm，厚度 5mm，质量 2.4g，表面磁通量 1000 高斯）施压 12h后，将磁铁取下释放压力 12h。在磁铁施加压力期间，小鼠进食正常，行动自由。 小鼠深部组织压力性损伤模型构建后，取得正常小鼠与模型组（第一天）小鼠伤口处皮肤肌肉组织（1.5cmⅹ1.5cm）进行 HE 染色，进行模型构建评估。
2.2 深部组织压力性损伤组织中铁含量的测定
2.2.1 深部组织压力性损伤肌肉组织铁离子浓度测定
实验前将所需手术器械进行高压灭菌。将小鼠置于洁净的工作台上，使用水合氯醛麻醉后处死小鼠，使用高压灭菌的眼科剪和组织镊取得小鼠伤口肌肉组织（1.5cmⅹ1.5cm），使用无菌的磷酸盐缓冲液冲洗 3 次，使用滤纸吸干组织表面水分，眼科剪剪碎小鼠组织，准确称取样品至 25mL 消解容器中，加入 6-8mL 王水和2mL 双氧水，盖紧消解罐，放入石墨加热板 120-200℃消解 50min，待样品消解完全，赶酸，冷却至室温后，转移至 10mL 的量瓶中，用超纯水多次冲洗消解罐，然后用超纯水定容，摇匀后获得样品溶液，使用质谱分析仪（Agilent 7700，美国）检测。
2.2.2 普鲁士蓝染色
① 小鼠模型构建第 1 天和第 7 天时，使用水合氯醛麻醉处死小鼠，无菌的磷酸盐缓冲液清洁小鼠局部伤口，擦干，使用无菌眼科剪和眼科镊剪下小鼠创面，清除组织内多余的脂肪与碎骨后，无菌的磷酸盐缓冲液冲洗 3 次，放入 4%多聚甲醛（组织固定液）中于 4℃冰箱固定组织 48h。
② 将固定好的组织置于一次性脱水盒中，根据分组进行标记。洗涤，将盛有组织的一次性脱水盒置于流水中冲洗数小时。将组织置于组织自动脱水机内依次由低浓度到高浓度梯度酒精脱水。脱水机内分别加入 75%酒精（4h），85%酒精（2h），95%酒精（1h），无水酒精 I（30min），无水酒精 II（30min）。加入酒精和二甲苯等量混合液（30min），二甲苯 I（20min），二甲苯 II（20min）。
第二部分 去铁胺水凝胶治疗深部组织压力性损伤的效果评价材料与方法
2 实验方法
2.1 DFO 水凝胶的制备
2.1.1 制备 CS 水凝胶：
将 1.0g CS 溶于 100mL 0.05% 醋酸中。然后向 CS 溶液中缓慢加入氢氧化钠溶液，直至 pH 值达到 8.5–9.0。将所得水凝胶用蒸馏水和离心机洗涤多次，并用蒸馏水透析，直至外部溶液被中和。透析后，以 14000r/min 离心 CS 水凝胶以去除多余的水，最后用搅拌机悬浮，得到均匀的凝胶。然后，凝胶在 80℃减压干燥。
2.1.2 DFO 水凝胶的制备：
DFO 粉末逐渐溶解在磷酸盐缓冲液中。将 CS 水凝胶溶液通过 0.2μm 滤膜过滤，在 4℃磁力搅拌(600r/min，5min)下缓慢加入 DFO 溶液。
2.2 DFO 水凝胶的体外药物释放
将溶解在 1mL 磷酸盐缓冲液中的 DFO/CS 水凝胶加入透析膜中。透析膜在 37℃的 40mL 磷酸盐缓冲液中孵育，100r/min 摇动。分别在 1、4、15、24、48、72、96、120、144、168 和 192h，收集 0.2mL 上清液并测量吸光度。上清液用 0.2mL 新鲜磷酸盐缓冲液替换。分析三份样品，并用磷酸盐缓冲液作为空白测量。制备不同浓度的 DFO 标准溶液，用紫外分光光度计在 295nm 波长处测量吸光度。每种标准溶液的吸光度测量 3 次，取平均值，得到校准曲线。
2.3 动物实验
2.3.1 DFO 对动物深部组织压力性损伤伤口愈合的效果评价
构建 C57BL/6 小鼠深部组织压力性损伤模型后，根据实验分组于 1、3、5、7、9、11、13 天注射 100μL 分组对应药物，模型组不做任何处理。分别于伤口形成的0、1、3、5、7、9、11、13、14 天时，在相同条件下使用数码相机拍摄小鼠伤口，使用 ImageJ 软件（NIH，WI，美国），通过威尔逊伤口收缩率公式，计算小鼠图像伤口收缩率(见公式 1.1)。
结果
1 DFO 水凝胶的表征与体外药物释放
制备 DFO/CS 水凝胶（0.25 w/v）。在室温下凝胶后，形成稳定状态，粘附于瓶底（见图 2.1 A）。扫描电子显微镜显示了冻干水凝胶的形态特征（见图 2.1 B），表明水凝胶具有均匀相互连通的多孔网格结构。多孔网格结构的直径约 50-10μm，可以容纳与释放 DFO。根据在 240h 的不同时间点测定吸光度得出 DFO/CS 水凝胶的药物释放曲线（见图 2.1 C），体外药物释放 240h，总共约有 91.67±1.98%的DFO 被释放至透析膜外。
讨论 ................................ 25
研究创新性和局限性 ........................ 28
结论 ................................. 29
讨论
1 DFO 水凝胶促进深部组织压力性损伤愈合分析
本研究通过制备 DFO/CS 水凝胶，评估在小鼠 DTPI 中的治疗效果和作用机制。结果显示，CS 水凝胶有效控制 DFO 释放，DFO/CS 稳定 HIF-1α 表达，调控下游基因 VEGF，SDF-1 和 TNF-α，降低 ROS 水平，调控巨噬细胞向 M2 型转化，降低炎性细胞浸润，促进肉芽组织，血管再生，加速伤口愈合。
DFO/CS 水凝胶控释系统，由于其溶胀性，弹性及可降解性，是可调节治疗药物生物利用度的一种方法，使药物结合到聚合物的网状结构中，伴随 CS 水凝胶被机体逐步降解，并且根据预设的方式从该网状结构的载体中持续释放药物被机体吸收利用，网状支架结构促使细胞增殖迁移，分泌细胞趋化因子，并随之被再生组织代替，可避免因保持一定血药浓度而反复输注药物对伤口的二次伤害。CS 可有效控制DFO 的药物释放，实现对 DFO 的缓释作用，延长药物作用时间，有效解决了 DFO半衰期短的问题。
DFO 可有效抑制细胞内 ROS 的生成，并呈现出一定的浓度依赖性。研究表明，铁驱动的 Feton 和 Haber-Weiss 反应可产生高毒性的羟基自由基（如 ROS），大量的ROS 会对健康细胞组织造成损害，包括血管内皮细胞，角质细胞，成纤维细胞等。蒋等人在小鼠原位器官移植模型中研究中发现，DFO 可减少 ROS 的生成，防止内皮细胞死亡。DFO 可通过减轻细胞内氧化应激反应，保护细胞正常功能状态，促进组织结构修复与功能再生。
研究的创新性和局限性
1 创新性
(1) 本研究以循证护理理论为基础，结合文献中压力性损伤的证据，考虑压力性损伤护理临床实践现况，以探索与改进现有护理临床实践证据。
(2) 首次探索小鼠 DTPI 模型中皮肤肌肉组织中铁含量的情况，发现小鼠DTPI 中存在铁含量升高，存在“铁蓄积”现象。
(3) 结合护理工作的伤口湿性愈合理论，应用 DFO 水凝胶敷料作为局部伤口组织支架，保持伤口环境密闭，持续释放 DFO，促进伤口愈合，初步探索压力性损伤的作用机制。
2 局限性
(1) 本研究仅证实 DTPI 肌肉组织中出现铁含量升高的现象，但是对于护理临床实验中压力性损伤患者的铁含量尚未得到进一步验证。
(2) 通过构建动物 DTPI 模型，证实 DFO 水凝胶促进小鼠 DTPI 伤口愈合，但是基础研究的证据级别相对较低，对 DFO 水凝胶敷料的临床研究还需要更深层，更进一步的研究，期待水凝胶敷料在未来临床实践中得到更多的应用，为护理循证实践提供更强力的证据。
参考文献（略）
