5.1.2 试验方法
（1）土壤理化性质检测方法
见 2.2.2。
（2）土壤含水率检测方法
称取 60 g 污染土样，摊匀在 110 mm 已称重的培养皿中，样品置于烘箱 80℃中烘干 24 h 以保证土壤样品恒重，期间将结块的土样破碎、研磨；将烘干后的土壤样品迅速转移至带有变色硅胶的干燥器中，待至冷却后称重。
表 5.1 污染土样参数
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第六章 结论与展望
6.1 结论
本文利用重庆市典型润滑油污染土壤，从中分离出一株高效石油烃降解菌 R13，经鉴定为皮式不动杆菌（Acinetobacter pittii）；通过对该菌的生长条件及降解特性进行系列探究，证实了该菌具有优良的润滑油降解特性；采用响应面法优化得到其最优的生物降解条件；利用绿色荧光蛋白（GFP），对 A.pittii R13 进行了分子生物学荧光标记，追踪其在土壤中的生长情况，结合润滑油降解情况，评价不同生物周期下润滑油污染土壤的修复效果。同时，对比本土微生物和荧光标记菌的生长情况，评价该菌对土壤生态的友好性。为润滑油污染土壤生物修复提供了理论基础。主要结论如下：
（1）通过对污染土壤中微生物进行为期一月的高浓度润滑油耐受驯化，采用富集培养、选择培养基筛选、平板涂布等方式从中分离出 27 株石油烃降解菌。以 24 孔板初筛，选择培养基复筛等方式观察分离菌株对润滑油的降解效率，同时结合菌落形态观察、革兰氏染色及生理生化等实验，筛选出最佳降解菌。通过 16S rR NA 序列同源性分析结果，最终确定菌株 R13 为皮式不动杆菌（Acinetobacter pittii）。
（2）探究了菌株生长环境（初始温度、pH、摇床转速、接种量）对润滑油降解效率产生的影响。通过响应面实验分析得出其最佳降解条件：温度 33℃、pH 7.1、转速 176 rpm、接种量 7.2%，在优化条件下实现了菌株对高浓度润滑油的全降解。
（3）利用分子生物学技术构建荧光发光菌，通过电转化法将载有绿色荧光蛋白基因的质粒 pGFPuv 和 pBBR1MCS-2 导入至 A.pittii R13，使其能够在正常生长的条件下利用紫外光（395nm）或蓝光（470nm）进行快速检测。实验结果表明通过质粒 pBBR1MCS-2能够成功构建基因工程菌，其遗传稳定性及荧光强度均表现良好，润滑油降解率也与未标记的菌株一致。
参考文献（略）
