前言
在机体新陈代谢历程中一种毁伤细胞并加快机体朽迈的物质会不停孕育发生，那便是自由基。它在机体中浓度很低且处于动态均衡，但若过多会冲破均衡氧化毁伤机体的生物大分子比方核酸、卵白质等，导致动脉粥样硬化、癌症等上百种疾病并加快机体朽迈等，但遗憾的是化学合成的抗氧化剂BHA、BHT等带有致癌性。与此同时，随着青霉素等化学抗生素问世以来有用治愈临床很多病菌熏染的疾病，但应用越来越泛滥导致细菌耐药性进步以及药物残留等负效应反而危害康健。差别于化学合成的药物，自然的抗氧化剂具有低毒、宁静且泉源遍及，而自然抑菌抗炎药物具有抗耐药性、副作用小的特点，除了抑菌还可以作为自然防腐剂进步食品宁静度。
青葙是药用价值很高的觅科青葙属一年生植物，据报道其具有抗菌消炎、止血凉血，清热解毒功效，可降血压，去瘙痒、白带等症，治疗眼膜炎、角膜炎，预防癌症和心血管病等功效。药用部位种子青葙子收录于药典中。近年来，随着人们需求上升以及药理药化研究不断深入，青箱药用和食用量越来越大。
随着研究学者对天然药物的研究，不断受到从植物中提取活性成分进行有效利用的限制性：盲目采挖的破坏、野生资源有限、大面积人工驯化困难、可用耕地日趋减少等。因此组织快繁等生物技术进行青葙的开发和利用迫在眉睫，从而早日解决药用植物资源供需问1植物组培的优点在于：首先次生代谢产物种类繁多、活性高、却难以合成。其次组培技术摆脱地域分布和气候季节限制，生长环境易于控制，有效减少土地资源和成本。
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第一篇文献综述
第一章青葙的国内外研究概况
1.1研究现状
青葙，是觅科青葙属一年生草本植物，在我国大部分省份均有野生和栽培⑴，特别在我国的福建省、浙江省、四川省、广东省等省份青葙的资源最为丰富。青葙又叫野鸡冠花、指天笔、牛尾巴花、白鸡冠、鸡冠菜、草蒿等[3]“青葙”的名字，始载于《本草纲目》[4]，李时珍这样描述青箱：莲叶苦，微寒，无毒，（治)邪气，皮肤中热，风瘙身痒，杀三虫，恶搭挤風痒烛，下部匿拖；揭汁服，大疗治病，止金痛血[5]。可见古人很早就开始探索其药用价值。同时目前来看，是一种颇受关注的野生药食兼用植物，所以它有着广阔的开发空间16]。青葙多见于田间路旁、草地河滩、山坡荒地等土壤疏松的地方，是常见的旱地矿地的杂草，所以易于栽培。嫩的青葙莲叶、苗皆可食用，是品质很好的可食性野菜[8],除了发生病虫害的情况很少之外，其嫩柔的口感，独特的清香，广受人们的喜爱，可将青箱炒食、凉拌、制汤、拌面或蒸食，亦可制藏储的干菜；由营养价值角度讲，青葙作为食用植物，营养繁多，百克青葙植物中分别0.64mg维生素B2、8.08mg胡萝卜素、65mg维生素C;每1克青葙干样中含有38.8ing钾、lOmg铜、6.82mg镁、2.73mg磷、1.12mg钠、166fig猛、367|xg铁、50^1§锌等，除此之外还富含蛋白质、粗纤维、脂肪等营养物质。由此看来青葙是一种天然的绿色食品，具有保健作用，同时还可以作为填补蔬菜供应淡季的高档品种[9]。此外，青葙株型以及花序优美，生长条件要求低，花期较长，可以作为一种具有巨大的开发潜力的草本花丼[ia]。从其药用价值角度来看，青葙具有很强的抗菌消炎作用，具有止血凉血，清热解毒功效，可降血压，去瘙痒、白带等症，具有治疗眼膜炎、角膜炎，预防癌症和心血管病等功效。
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第二章植物组织培养研究概况
2.1药用植物组织培养研究
植物组织培养(Plant tissure culture),顾名思义，就是指在人工设置的条件下于人工制备的培养基中，无菌操作对植物组织、细胞、原生质体等进行培养而脱分化生成愈伤组织，并逐渐分化新的器官直至长出再生完整植株的手段。植物组织培养别名为离体培养(Culture in vitro)>试管培养（In test-tube culture)，是因为一般都将离体植物材料基本在试管等器皿中培养。从1900年左右开始，植物组织培养这一生物技术手段以植物生理学作为理论指导蓬勃发展。直到1980年左右科研学者已经将一百三十多科一千五百多种植物的离体组织培育成再生植株[91]。理论上给予适宜条件，所有植物器官、组织或细胞都可以进行离体培养，这项技术应用可涉及农业、畜牧业、林业、药业等，因此这个研究领域十分活跃，与人的生活息息相关。
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第二篇 研究内容 ............................23-56
第一章 青葙愈伤组织的诱导及抑制褐化的研究 ................23-33
1.1 材料和方法............................ 23-25
1.2 结果 ........................25-32
1.3 讨论与小结 .........................32-33
第二章 青葙愈伤组织的增殖研究 ...................33-43
2.1 材料与方法 .........................33-35
2.2 结果 .........................35-42
2.3 讨论与小结 ..........................42-43
第三章 青葙子及其愈伤组织抗氧化活性研究 .......................43-47
3.1 材料与方法 ......................43-45
3.2 结果 ........................45-46
3.3 讨论与小结................ 46-47
第四章 青葙子及其愈伤组织抑菌活性研究
自青霉素等化学抗生素问世以来有用治愈临床很多病菌熏染的疾病，但随着应用过于泛滥，细菌耐药性进步以及药物残留等负效应反而危害康健。自然抑菌抗炎药物具有抗耐药性、副作用小的特点，除了抑菌，还可以作为自然防腐剂进步食品宁静度，因此科研学者越来越存眷这个范畴。
青葙子作为传统中药，具有抑菌杀虫等作用。已有研究报道，青葙根也可以有效抑制多种植物病原菌，但是青葙子及其愈伤组织是否也具有抑菌活性是本实验探索的目的，因此本文从青葙的愈伤组织与青葙子不同提取物着手，研究抑菌效果，进一步讨论其抑菌成分。
4.1材料与方法
4.1.1材料
青葙当年成熟种子，釆自吉林农业大学科技示范园，经吉林农业大学中药材学院田义新教授鉴定为青葙(Cehsia argenteaD的种子；实验室自制青葙愈伤组织。供试菌种为：金黄色葡萄球菌、Staphy lococcus aureus)、沙门氏菌(Salmonella enterica)、绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa) n 链球菌大肠杆菌coli )。
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结论
目前，有关青葙的研究多在其、食用方法、引种栽培技术以及其原药材理化鉴定、有效活性成分分析及其保肝、抗肿瘤等药理药效等方面的研究，尚未见青葙组培快繁研究方面的报道。由于青葙长期处于自然野生状态，目前资源分布仍较为分散，产量极低，人为利用破坏严重，无法满足生产发展的需要。本文利用采自吉林地区的青葙种子为材料，采用单因素、正交试验等方法，旨在明确不同外植体类型、不同基本培养基、不同碳源及碳源浓度、不同激素及其不同浓度配比、不同pH值、光照温度条件、不同接种量、继代周期与继代次数、对外植体的预处理及添加不同吸附剂、抗氧化剂等因素对青葙愈伤组织诱导、增殖以及外植体的防褐变等方面的影响。又以愈伤组织为材料，对比原药材青葙子，利用不同有机溶剂溶解，对不同提取物进行抗氧化、体外抑菌活性的研究。本实验筛选出青葙愈伤组织最优培养条件，以期快速获取优良的无菌存活外植体，建立优良无性系，期望能为青葙进一步幵发利用提供一定的技术依据。主要研究结论如下：
(1)本实验首次成功的诱导了青葙的愈伤组织。以青葙的种子在无菌条件下培育无菌试管苗，用不同的消毒方法对青葙子的灭菌方法进行优化，得出以0.3%的升亲消毒lOmin的处理组合最佳，即洗漆剂溶液浸泡lOmin，流水冲洗30inin，用无菌水清洗3次，75%乙醇浸泡40?50s，无菌水冲洗4?6次，无菌率达〗00%，种子萌发率也达100%，出芽所需的时间最短。再从无菌植株上取青葙叶片与莲段作为愈伤组织诱导的外植体。经过条件蹄选，青葙无菌苗的叶片在诱导过程中，大部分凋萎干枯，继续存活的也无愈伤组织生长。可能是无菌苗的叶片细胞没有诱导愈伤组织的能力，以莲段为外植体诱导效果为好。在MS培养基作为基本培养基，以0.5ing/L NAA+0.5mg/L 6-BA为诱导激素组合，在庶糖浓度为3%，pH值调节至6.0左右，并在无光照暗培养条件下的诱导出的愈伤组织品质最佳。
(2)在青葙的愈伤组织诱导过程中，发现对外植体进行冷藏48h的预处理，再添加适当浓度的吸附剂PVP和抗氧化剂，能够有效的抑制外植体切割部位出愈时变红褐色的现象，从而更好的诱导出优良的愈伤组织。
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参考文献（略）
