前言
随着生活节奏的加快，睡眠疾病的发病率不断上升，对睡眠的研究及睡眠疾病的治疗显得尤为重要。睡眠障碍可能产生的影响包括注意力记忆力受损、焦虑抑郁、食欲下降及自身免疫力减弱等。根据国际睡眠障碍性疾患分类（ICSD-2)可将睡眠障碍分为：①失眠②与呼吸相关的睡眠障碍③非呼吸障碍性白天过度嗜睡④昼夜节律紊乱所致的睡眠障碍⑤异态睡眠⑥睡眠相关的运动障碍⑦独立症候群，正常变异及尚未明确的问题⑧其他睡眠障碍。其中失眠与嗜睡因发生较多且影响较大成为人们关注的主要方面。阴阳寢寐学说“]认为，藉寐是阴阳消长平衡的过程，太阳升起时人体的阳气随自然界阳气生发而由内出外，表现为觉醒（磨）；入夜时阳气潜藏于内，表现为睡眠（寐）。磨寐正常变化的基础是营卫阴阳的正常运行、调和，心神得以安定而调节转化有序，而睡眠疾病的发生是由于人体阴阳失衡所致。当饮食不节、情志失常、思虑过度、病后体虚等，导致阴不潜阳，心神不安，表现为不寐病症。而心、脾、肾的阳气虚弱，湿、痰、疲血阻滞脉络，导致痰湿蒙蔽心穷，表现为多寐病症。临床经验也提示，不寐多为阴虚症，多寐多为阳虚症。在治疗上，西药起效快，在早前的临床治疗中占有极重要的地位。但随之而来的是副作用及疗效的反弹，单纯的西药治疗已不能满足临床上的治疗需求。运用中医辨证思想，指导临床治疗睡眠障碍已成为新的趋势。根据阴阳理论，不寐病症多为阴虚，当以滋阴为主，多寐病症以阳虚为主，治以补阳为上。肾藏有先天之精，肾阴肾阳为五脏六腑阴阳之根本。右归丸主治肾阳不足，治以温补肾阳，填精益髓，阴阳兼顾，阴中求阳；左归丸主治真阴不足，治以滋阴补肾，填精益髓，且育阴涵阳，阳中求阴。左归丸与右归丸的治疗思想符合阴阳互补、消长平衡，与阴阳德寐之理相通。
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第一章材料与方法
1材料
1.1动物
实验选用健康成年雄性Spmgue-Dawle大鼠（260g-320g，n=35，福建中医药大学动物中心提供）。所有大鼠饲养于清洁通风、温度21-25°C、明暗周期变化（光照时间7:30-19:30)的独立有机塑料饲养笼内，饲养笼顶盖加高Scm，防止手术后碰撞手术部位。水源饲料干净充足，活动不受限。
1.2药品和试剂
戊巴比妥钠（Pentobarbital Sodium, FW248. 25) Sigma
8-OH-DPAT (S-Hydroxy-DPAT hydrobromide, FW328. 29) Tocris
WAY 100635(WAY 100635 maleate, FW538. 64) Tocris
多聚甲酸 国药
鹿糖 国药
乙腈（色谱纯） merck
标准品 Sigma
Waters AccQ'Tag 化学试剂包 Waters
裂解液+PMSF 上海碧云天公司
配胶试剂盒， 上海碧云天公司
TRIS(Hydroxymethyl)aminomethane 厦门鹭隆公司
Sodium dodecyl sulfate 厦门鸾隆公司
甘氨酸(98%, Vetec) Amersco
甲醇（分析纯AR) 国药
PVDF膜(0.45ym) Solarbio
预染蛋白Marker (10-170KD) Fermentas
脱脂奶粉 cell signaling
一抗：GABABR1 (R-300), Santa Cruz； ^ -actin Antibody 美国SAB公司
二抗：辣根过氧化物酶标记二抗（Goat anti-Rabbit IgG-
Secondary Antibody HRP conjugated) 美国SAB公司
Beyo ECL Plus显影液 上海碧云天公司
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2方法
2.1动物手术（脑立体定位、微量注射导管嵌入）
大鼠经戊巴比妥钠（2%，35mg/kg)腹腔注射麻醉，将头部牢固于脑立体定位仪，?确保项骨不移动后举行备皮，切开颇骨外貌皮肤袒露骨膜，用浓度3%双氧水来回擦拭卢页骨外貌去除骨膜，直至人字缝与前図明白可见，干净颇骨外貌。凭据大鼠脑立体定位图谱及相干研究文献所示，确定大鼠中缝背审定位点为（-7. 8mm, 0. 0mm，-6. 4mm)，利用脑立体定位仪正确定位。钻孔后插入外径为0.64mm的注射套管，深度为6. 4mm,插入时连结导管垂直颜骨外貌，行动迟钝匀速。手术中大鼠大概有出血及呼吸困难紫组等症状，应予以止血或停息手术，待症状缓解后继承。利用牙科石膏粉混淆502胶水粘合套管与顿骨部门，缝合顿骨外貌皮肤并在伤口处涂抹红霉素软膏防备伤口炎症。手术后的大鼠安排在加高顶盖的改进鼠笼中独立豢养，连结环境干燥清洁，无特别环境术后2-3小时大鼠即可正常运动及进食饮水。术后规复时间为7天，时期不举行任何实行运动。
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第二章 结果..................... 18-21
1 高效液相色谱法检测大鼠下丘脑区域GABA含量变化 ..............18-19
1.1 中缝背核内微量注射5-HT_(1A)药物对下丘脑内GLU、GABA含量的影响 ...18-19
1.2 中缝背核内微量注射5-HT_(1A)药物后给予中药灌胃7天.... 19
2 Western Blotting检测大鼠下丘脑区域GABAB受体..... 19-21
2.1 中缝背核内微量注射5-HT_(1A)药物对下丘脑内....20
2.2 中缝背核内微量注射5-HT_(1A)药物后给予中药灌胃对下.....20-21
第三章 讨论
1中缝背核内微量注射5-HT1A药物影响大鼠睡眠相关物质的变化趋势及可能机制
5HT是脑内与就寝相干的物质之一，但其对就寝的影响作用还处于争论和研究中。对付就寝模子的化学法创建，PCPA的注射曾被多数研究所使用，但在厥后的研究发明，这种模子所产生的就寝布局转变动多的是应激性的反响，脑电图转变的转变不明显。于是模子研究的偏向开始转向脑内的核团注射。5-HT,a受体位于5-HT神经元胞体、树突及突触后。刺激1A受体树突部门克制了血清素的开释本实行模子参照1A受体的一系列研究，研究以为赐与中缝背核微量注射5-HTia冲动剂8-0H-DPAT可以增长快动眼就寝，淘汰觉醒时程。相反，赐与5-HT,a停滞剂WAY100635则引起快动眼就寝淘汰，觉醒时间延伸。微透析8-OH-DPAT到中缝背核中会低落约50%的5-HT含量，同时明显增长快动眼就寝。而章功良等的研究也提示，克制了中缝背核内的5-HT合成能增长快动眼就寝，淘汰觉醒时间。综合以上研究效果我们可以以为，中缝背核内5-HT的含量影响着就寝-觉醒的产生变革，赐与1A受体冲动剂微量注射可以大概克制5-HT的合成，淘汰高兴性物质的产生，到达促进快动眼就寝的作用。在中缝背核中同样存在非5-HT神经元，实行评释，有一部门的非5-HT神经元同样表达1A受体，这些神经元中大部门是GABA神经元[而GABA与GLU之间存在肯定的转换干系，GLU可以颠末脱经天生GABA，要是代谢途径产生非常则导致GLU在脑内的过分积聚，产生高兴性的神经毒性。本实行提示，赐与1A受体冲动剂8-OH-DPAT微量注射到中缝背核中可以大概淘汰高兴性物质5-HT及GLU含量的同时陪同克制性物质GABA的增长。同样的，赐与1A受体阻断剂WAY100635微量注射到中缝背核中可以大概诱导5-HT的合成，增长高兴性神经递质GLU的含量，间接淘汰了克制性神经递质GABA的含量。这种变革提示脑内高兴性物质与克制性物质存在均衡干系，二者的变革导致就寝与觉醒的产生。快动眼就寝增长的时间，陪同脑内克制性物质的增长，高兴性物质淘汰。同样，觉醒的产生，陪同着脑内高兴性物质的增长和克制性物质的淘汰。当二者的均衡被粉碎而且依赖自身不克不及修复时，就体现为就寝布局的转变，临床上体现为失眠症或嗜睡症。
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结论
1.中缝背核内微量注射5_HT1A受体激动剂8-0H-DPAT引起下丘脑内抑制性神经递质GABA增加，GLU减少。相反的，微量注射5_HT1A受体阻滞剂WAY100635引起GLU增加，GABA减少。
2.右归丸灌胃降低了抑制性物质含量，左归丸灌胃降低了兴奋性物质含量，最终达到二者平衡。阴阳寤寐学说用于指导中医中药治疗睡眠疾病具有一定疗效
3.GABAb受体可能参与睡眠的调控，中药作用靶点需进一步研究。
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参考文献（略）
