第五章 结论与展望 ......................................... 36
5.1 主要结论 .................................... 36
5.2 创新点 ...................................... 37
5.3 展望 ................................... 37
第四章 不同品种工业大麻叶提取物对大肠杆菌的抑制作用
4.1 材料与方法
4.1.1 化学试剂与实验材料
化学试剂：石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、乙醇、乙腈等均为工业级，均被购于北京生化试剂公司；营养琼脂培养基、营养肉汤培养基，均被购自海博生物技术有限公司；冰醋酸购自国药集团化学试剂有限公司，去离子水由麻类研究所实验室的去离子水设备获得。
实验材料：
（1）不同品种工业大麻材料：从麻类研究所的基地栽培室中选取 H1-H10（原品种 H1 和H2 来自云南基地；H3 和 H4 来自于湖南永州基地；H5 和 H6 来自湖南娄底；H7、H8、H9 和 H10来自湖南长沙基地；H1-H10 品种全部种植于湖南长沙基地）的生长成熟期品种的工业大麻，45℃干燥粉碎，-20℃低温保存备用。
（2）不同器官工业大麻材料：以 H1 为代表品种，在工业大麻的盛花期，分别采收其叶、花和茎，45℃烘干、粉碎，-20℃低温保存备用；供试菌株：大肠杆菌（E.coli）由中国农业科学院麻类研究所提供；CBDA 和 CBDVA 参考标准品购自上海玉博生物科技有限公司。
4.1.2 主要仪器和设备
本章所用到的实验仪器、规格型号与生产厂家明细见表 4-1。
表 4-1 实验仪器
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第五章 结论与展望
5.1 主要结论
本研究以中国农业科学院麻类研究所实验基地提供的工业大麻为原材料，以正己烷、乙酸乙酯、石油醚为提取溶剂，采用对倍稀释法测定工业大麻叶提取物对几种常见的菌株（大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌、黄曲霉菌）的抑菌活性，同时并以此为研究对象，以确定其抑菌活性、生长曲线、细胞膜完整性等其他指标；运用高效液相仪器对工业大麻叶提取物的有效抑菌成分进行测定；同时采用扫描电镜观察其对菌体超微结构的影响，以期获得工业大麻叶抑菌活性成分的特点及抑菌机理，为工业大麻叶的资源利用得到更广泛的开发而提供理论依据。具体结果如下：
1. 工业大麻叶提取物对蜡状芽孢杆菌和黄曲霉菌没有明显抑制作用，但对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌抑菌效果显著，抑菌圈分别为 15.57±1.65 mm、14.86±1.37 mm。
2. 工业大麻叶提取物可明显降低大肠杆菌的生长速率，其最低抑菌浓度（MIC）值为 6.25 mg/ml。随着作用时间的延长，电导率从 0.597 mS /cm 增加到 1.319 mS /cm，DNA 等物质检测的OD260 nm 与对照组相比仅上升了 55.97%，β-GAL 活性量与对照组相比下降了 72.51%，碱性磷酸酶（AKP）的含量增加到了 0.886，与对照组相比增加了 74.94%，初步抑菌机理探究表明，工业大麻叶提取物可以改变大肠杆菌细胞膜严重受损的构象，造成核酸，蛋白等大分子物质泄漏，破坏细胞壁使得 β-GAL 活性检测细胞壁合成的半乳糖物质含量下降，细胞壁与细胞膜之间存在的碱性磷酸酶（AKP）的含量大量流出并使得胞外含量上升。从而达到了抑制大肠杆菌生长的作用；扫描电镜结果显示，大肠杆菌的菌体细胞形态发生严重变形，大面积菌体细胞凹陷破裂，粗糙皱缩，无饱满感，出现成团的凹陷堆砌物，最终抑制细胞的生长。因此，在一定范围的浓度下，工业大麻叶提取物对大肠杆菌有抑制生长甚至杀灭作用。
3. 工业大麻叶提取物在不同极性的有机溶剂（石油醚、乙酸乙酯、正丁醇）中进行分离，发现石油醚和乙酸乙酯提取物的抑菌效果显著。同时通过高效液相色谱图观察，石油醚和乙酸乙酯部位的峰的位置大致一样，采取两部位的溶液混合，同时对四个分段组分（I、Ⅱ、Ⅲ、IV）进行溶液采集，其中组分Ⅱ、Ⅲ显现出较高的抑菌活性；然后通过高效液相仪器，与 CBDA 和 CBDVA参考标准品进行比对，判断出Ⅱ、Ⅲ这两个部分主要有效成分就是 CBDVA 和 CBDA。
参考文献（略）
