本文是一篇农业毕业论文，本试验首先采用 Tricine-SDS-PAGE 电泳法、考马斯亮蓝 G -250 法和 ELISA 法，分别测定 6 副刚娩出新鲜猪胎盘中胎盘肽含量、相对分子质量和生殖激素含量；然后选取 36 头预产期、体重相近的经产大×长二元母猪，将其随机分为 4 组，每组 9 个重复，每个重复 1 头猪。对照组饲喂基础日粮，试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组在基础饲粮中分别添加 1%、3%、5%的猪胎盘粉。试验于妊娠 104 天开始，至产后 21 天结束。
1 文献综述
1.1 胎盘内的活性成份及生物学功能
1.1.1 胎盘肽免疫调节功能
胎盘是一种成分比较复杂的内分泌器官，含有多种免疫调节因子，其中胎盘肽（placental polypeptide，PP）是最主要的免疫调节物质，亦称之为胎盘因子（placental factor，PF）。胎盘肽是由核苷酸及肽类物质混合而成的小分子多肽，其理化性质稳定，外观呈微黄色的澄明液体。周国华用加脲的 Tricine-SDS-PAGE 电泳试验法证明了牛、羊、猪胎盘中均含有 PF，并分别用其胎盘肽对兔免疫抑制淋巴细胞进行体外实验，结果显示牛、羊、猪的胎盘肽均能使处于免疫抑制状态的兔淋巴细胞转化率提高。Matsumura研究发现，人胎盘中含有肌动蛋白和肌球蛋白，其亚基均有免疫印迹反应，说明胎盘对机体免疫调节功能具有促进作用。
1.1.1.1 调节免疫细胞功能
胎盘因子(PF)能促进吞噬细胞的吞噬作用，张华等分别用低、中、高 3 个不同浓度羊胎盘免疫调节因子对小鼠腹腔巨噬细胞进行体外培养实验，结果显示 3 个浓度组均能不同程度促进巨噬细胞的吞噬作用。PF 可增强 T 淋巴细胞 E 受体的表达。用 PF 进行活性 E玫瑰花环形成试验（Ea），结果显示 PF 能使脱受体后的淋巴细胞 Ea 值明显上升，表明PF 能促进淋巴细胞 E 受体活性恢复。此外，方廖琼研究认为，PF 能促进 T 淋巴细胞CD4+、CD8+成熟活化以及提高分泌 IL-2、IL-4 的水平，从而促进 T 淋巴细胞的免疫功能，且 PF 具有促进 B 淋巴细胞分泌 Ig-G 抗体和 B 淋巴细胞增殖分化的功能，对免疫抑制小鼠分泌抗体能力有显著改善(P< 0.01)。红细胞作为机体氧气运输工具，不仅有携氧能力，对体内免疫反应也有重要作用，用 PF 对 25 例精神分裂症患者进行红细胞 C3b受体酵母花环测定法进行实验，结果表明 PF 能明显提高红细胞 C3b受体酵母花环百分率。
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1.2 胎盘内激素及激素调节功能
1.2.1 绒毛膜促性腺激素
绒毛膜促性腺激素（CG）在妊娠阶段对激素水平调控起到重要作用，CG 能结合黄体膜上的黄体受体，激活腺苷酸环化酶产生反应，从而增加妊娠黄体的作用时间。CG 可促进胚胎着床，维持早期胚胎发育，作用机理是 CG 能产生免疫抑制作用，使妊娠母体免疫力下降，降低母体对胎儿的排斥性从而增加受胎几率。此外，胎盘滋养层中 CG 还具有自分泌和旁分泌调节功能，CG 的分泌水平与其他激素水平密切相关，滋养层中 CG 的水平与促性腺激素释放激素(GnRH)之间呈现双向作用，即高剂量的 GnRH 抑制 CG 分泌，低剂量则促进 CG 分泌。
1.2.2 胎盘催乳素
胎盘催乳素（PRL）是妊娠期和哺乳期重要的调控激素，妊娠期间所产生的 PL 水平是衡量胎盘功能的一个重要指标，若 PRL 水平过低则胎儿存在流产的危险，这与 Lucy MC等所报道 PRL 在妊娠期间对黄体生成有促进作用的观点相一致。另外，PRL 能够促进乳腺的发育和乳汁的生成，Farmer C 等给体重为 75kg 左右的母猪连续 29d 注射催乳素（4mg/d），结果显示乳腺实质性器官提升了 116%，乳腺实质中 DNA 的含量提升了160.9%，并伴有乳汁分泌现象。PRL 不仅能促进乳腺腺体组织细胞有丝分裂的活动，同时还能有效的增加泌乳母牛的泌乳量，改善乳汁中乳蛋白和乳糖的含量[14]。陈建晖研究发现，催乳素能促进奶牛乳腺上皮细胞酪蛋白和乳糖的分泌能力。
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2 猪胎盘中生物活性肽的提取及含量测定
2.1 材料与方法
2.1.1 试验材料
新鲜猪胎盘，由大庆市龙凤区某养殖场提供。
2.1.2主要试剂
2.1.2.1Tricine-SDS-PAGE 电泳法主要试剂
丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺为天津市科密欧化学试剂有限公司产品；溴酚蓝、巯基乙醇均为北京科昊达生物技术公司产品；冰醋酸、尿素、甘油为国药集团化学试剂有限公司产品；三羟甲基氨基甘氨酸（Ttricine）、十二烷基磺酸钠（SDS）为 Biomo 公司产品 ；Tris 碱、TEMED 为上海化学试剂公司产品 ；过硫酸铵（AP）为 BIB 产品 ；超低分子蛋白 maker 为北京 Solarbio 公司产品。
选取 6 副刚娩出鲜活猪胎盘，从每副胎盘中 3 个随机部位各剪取 1g 胎盘组织，并分别标记为 A1、A2、A3 ；B1、B2、B3……F1、F2、F3，将胎盘组织用盐水冲洗干净后用吸水纸把水分吸净，加入 1.5 倍去离子蒸馏水，置于高速组织捣碎匀浆机（12000r/min，3min/次，10 次）匀浆，经 3 次反复冻融后于高速冷冻离心机冷冻离心（8000r/min，20min），取上清液用 0.45μm 微孔滤器进行微滤处理，以除去不溶性杂质，将提取液进行分装，-80℃冷冻保存待测。
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2.2 结果
2.2.1 猪胎盘肽分子量检测结果
由图 2-2 可看出 6 副猪胎盘样品在 14.4KD 处均有较为清晰的蛋白质条带，其他条带不明显。对标准蛋白质样品的分子质量的对数（lgMw）和在分离胶中的相对迁移率（Rf）进行了回归分析，绘制标准曲线（见图 2-1），并得出相应的线性回归方程为 Y=-0.5995Rf＋1.3167，R2=0.9866。从标准蛋白曲线中查得 6 副猪胎盘中胎盘肽分子质量分别为：14.219KD、13.801 KD、12.012 KD、12.357 KD、11.326 KD、10.197 KD，明确表明猪胎盘中含有小分子多肽。
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3 猪胎盘粉对哺乳母猪繁殖性能及乳汁成分的影响............... 17
3.1 材料与方法 ................. 17
3.1.1 试验材料 ................ 17
3.1.2 试验设计及饲粮 ............ 17
4 猪胎盘粉对哺乳母猪免疫指标及生殖激素的影响....................... 23
4.1 材料与方法 .................. 23
4.1.1 试验材料................. 23
4.1.2 试验设计及饲粮................... 23
5 结论与展望................ 27
5.1 试验总体结论 .............. 27
5.2 展望 ................ 27
4 猪胎盘粉对哺乳母猪免疫指标及生殖激素的影响
4.1结果
由表 4.1 可知，试验Ⅱ组 IL-6 的含量极显著高于Ⅰ组（P<0.01），同时显著高于对照组和试验Ⅲ组（P<0.05）；与试验Ⅲ组对比，试验Ⅰ组中 TNF-α 和 IgG 的含量均显著升高（P<0.05），IgM 含量极显著升高（P<0.01），其余各组间的 TNF-α 含量差异不显著（P>0.05），与对照组相比，试验Ⅰ组 IgM 含量极显著高于对照组（P<0.01），且试验Ⅰ组和试验Ⅱ组之间差异不显著（P>0.05），与试验Ⅲ组比较，试验Ⅱ组 IgG 含量显著高于试验Ⅲ组（P<0.05），但试验Ⅰ、Ⅱ组和对照组之间差异不显著（P>0.05）；与对照组相比，试验Ⅰ组的 IFN-γ 和 IgA 含量显著升高（P<0.05），而试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组之间 IFN-γ 和 IgA 含量差异不显著（P>0.05）。
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5 结论与展望
5.1 试验总体结论
1 通过 Tricine-SDS-PAGE 电泳法测出 6 副猪胎盘中胎盘肽的相对分子质量平均水平约为 12.31±1.51KD；考马斯亮蓝 G-250 法测出 6 副猪胎盘中胎盘肽的含量平均水平为0.77±0.03 mg/g；ELISA 法测出 6 副猪胎盘中催产素、前列腺素 E2、催乳素、绒毛膜促性腺素平均含量分别为 16.34±1.6 pg /ml、521.73±75.5 pg /ml、536.07±66.95 mlU /ml、6.98±0.59mlU /ml。
2 在饲粮中添加猪胎盘粉对哺乳母猪繁殖性能及乳成分都有不同程度的改善作用。母猪繁殖性能中以母猪泌乳力、仔猪断奶重及断奶窝重、泌乳期仔猪平均日增重变化最为明显；乳成分中以乳糖和乳脂的含量升高最为显著。其中，均以 5%剂量组增加最为明显，而 3%剂量组与 5%剂量组之间差异不明显。
3 在饲粮中添加猪胎盘粉能改善哺乳母猪机体免疫力和调节体内生殖激素水平。母猪分娩后第 3 天和第 15 天，与各组相比较，3%剂量组的免疫水平改善最为明显，其中以 IgA、IgG、IgM、IL-6 和 IFN-γ 含量提升最为显著，其他免疫指标变化不明显；分娩后第 3 天和第 15 天母猪体内生殖激素水平显示，3%剂量组和 5%剂量组的 PRL 含量均比其余任意两组明显升高，而 3%剂量组与 5%剂量组之间差异不明显。
