1 材料与方法
1.1 材料
比格犬（18 月龄，江苏亚东实验动物研究院有限公司，中国）；
钴铬合金（钴铬合金粉末，浙江亚通焊材有限公司，中国）；
金属 3D 打印机（TR150，南京前知智能科技有限公司，中国）；
钛金属（钛盘，山西西京医疗设备有限公司，中国）；
DeRTe 牙科数控雕铣机（DT4000，广州建三自动化科技有限公司，中国）；
EP 管（7 mL，海门瑞博实验器材厂，中国）；
静脉采血针（0.7X25 mm，圣光医用制品股份有限公司，中国）；
一次性注射器（5 mL，江苏正康医疗器械有限公司，中国）；
针头式过滤器（0.22 μm，浙江硕华生命科学研究股份有限公司，中国）；
离心管（15 mL、50 mL, Thermo, USA）；
树脂增强型玻璃离子粘固剂（RelyXTM Luting 2，Minnesota Mining and Manufacturing Company，USA）；
微量元素采血管（Becton，Dickinson and Company，USA）；
浓硝酸（70%，Thermo Fisher Scientific，USA）；
戊巴比妥钠（粉末，山东西亚化学工业有限公司，中国）；
速眠新Ⅱ注射液（敦化市圣达动物药品有限公司，中国）；
苏 3 号注射液（敦化市圣达动物药品有限公司，中国）；
乙醇（75%，汕头市西陇化工有限公司，中国）；
明胶海绵（60X20 mm，江西省翔恩医疗科技发展有限公司，中国）
超硬石膏粉（Kulzer，LLC，USA）；
1.2 方法
1.2.1 比格犬的购买与适应性喂养
该研究方案已获得福建医科大学附属口腔医院生物医学研究伦理委员会的批准（附录一），实验人员考取了实验动物从业人员资格证（附录二）。向江苏亚东实验动物研究院有限公司订购约 18 月龄，体重 10～16 kg 的雄性比格犬，并要求其出具实验动物生产合格证（附录三）。待比格犬送达后，于饲养场所（联勤保障部队第九〇〇医院比较医学部，现已改名动物实验中心）进行适应性喂养7 天。本实验选用 6 只比格犬，随机分为 SLM Co-Cr 合金支架组和 CNC-milled CP-Ti 支架组，每组 3 只。
1.2.2 比格犬上颌金属支架的制备
实验操作前比格犬禁食 12 小时，予以速眠新Ⅱ注射液（肌注 1.6 mg/kg）诱导麻醉，待其瘫软后抱至手术台，随后注射 3%戊巴比妥钠溶液（前臂静脉注射5-10 mg（/kg·h））进行深层麻醉并对其四肢进行固定，使其成为仰卧位（图 1.1）。以比格犬眼反射消失作为深层麻醉成功的标志。用沾有 75%酒精的棉花对比格犬左耳进行消毒后，利用打孔器比格犬进行耳标标记。同时拉开上下颌，牵出舌头并侧方固定，充分暴露上颌后牙。使用刮治器刮除比格犬牙面的牙结石后用金刚砂车针磨改比格犬上颌尖牙、第四前磨牙及第一磨牙以预留出个别带环的空间。待牙齿预备完成后，利用个别托盘对比格犬上颌进行硅橡胶印模制取（图 1.2）。
2 结果
2.1 各组样本内各时间点金属离子种类和浓度
各组样本内金属离子种类和浓度见表 2.1 至表 2.8，结果以均值±标准差（�̅�±S）表示。因血液中本身含有 Fe 离子，其含量远大于金属支架析出量，会对实验数据造成影响，为确保各样本相关性检验的准确性，Fe 离子浓度均未纳入统计。
2.1.1 CNC-milled CP-Ti 组各样本内金属离子种类和浓度结果
表 2.1 至表 2.4 为 CNC-milled CP-Ti 组黏膜，毛发，全血和血浆的金属离子种类和浓度，结果显示：各样本内可以检测到金属离子，黏膜，毛发，血浆均检测到 Ti 离子，Ni 离子和 Cd 离子，全血未检测到 Cd 离子；各金属离子浓度也存在不同，其中各离子析出浓度从高到低依次为：Ni＞Ti＞Cd。
2.2 各组样本内各时间点金属离子总浓度
将上述各组不同时间点的金属离子浓度相加，可得出各组样本各时间点金属离子总浓度，结果以均值±标准差（�̅�±S）表示。各组各类样本间分别进行相关性分析。
2.2.1 CNC-milled CP-Ti 组金属离子总浓度结果
CNC-milled CP-Ti 组将 Ti 离子，Ni 离子和 Cd 离子浓度相加，得到金属离子总浓度值。如表 2.9 和图 2.1 所示。
通过对 CNC-milled CP-Ti 组数据进行重复测量方差分析和时间点两两比较：
1.黏膜组织样本：不同时间点的金属离子总浓度差异具有统计学意义（P=0.000＜0.05）。时间点两两比较可得，0 天仅与 1 周，1 个月的金属离子总浓度差异具有统计学意义（P0d，1w=0.003＜0.05；P0d，1m=0.038＜0.05），且 2 个月，3 个月，4 个月，5 个月，6 个月各时间点的两两比较，其金属离子总浓度差异均不具有统计学意义（P2m，3m=0.108＞0.05；P2m，4m=0.297＞0.05；P2m，5m=0.998＞0.05；P2m，6m=0.932＞0.05；P3m，4m=0.971＞0.05；P3m，5m=0.819＞0.05；P3m，6m=0.407＞0.05；P4m，5m=0.807＞0.05；P4m，6m=0.636＞0.05；P5m，6m=0.981＞0.05），根据图形可得，CNC-milled CP-Ti 组比格犬的黏膜组织内金属离子总浓度在 1 个月时到达高峰值，随后下降回未佩戴金属支架前的离子水平并趋于平稳。
2.毛发组织样本：不同时间点的金属离子总浓度差异具有统计学意义（P= 0.004＜0.05）。时间点两两比较可得，0 天仅与 4 个月的金属离子总浓度差异具有统计学意义（P0d，4m=0.041＜0.05），根据图形可得，CNC-milled CP-Ti 组比格犬的毛发组织内金属离子总浓度略有波动，在 4 个月时到达最低值。
3.讨论…………………31
4.结论……………….……33
全文总结….……………35
3 讨论
目前，人们越来越关注牙科材料的生物相容性，这可能是因为临床上患者对所使用的牙科材料过敏反应的频率增加了，也可能是人们对这些材料的不良影响的认识提高了。金属材料已成功地应用于牙科多年，研究[52]表明，牙科金属材料在口腔内会发生电化学腐蚀从而对生物体造成一定的破坏。其中金属的腐蚀会造成金属离子的释放，与时间有一定的正相关性[53-54]。这些释放出来的金属离子被认为是造成健康危害的主要原因[55]。因此，研究牙科金属材料离子析出种类和浓度是判断其生物相容性优劣的关键因素。
临床上目前所常用的牙科金属材料均有自己的明确成分，通常彼此不同。不同制作方式的某种牙科金属材料成分也基本不会完全一致。随着数字化技术和加工工艺的发展，选择性激光熔融和数字化切削制作的口腔修复体逐渐在临床得到推广。对于钴铬合金来说，因其硬度比钛金属高，对数控切割的刀具损伤更大，因此，市面上多采用选择性激光熔融进行该种材料的加工；又因为钛金属本身活泼的化学性质，市面上对该金属材料的加工多采用计算机数控切削法。本研究选用的这两种制作方式的金属修复体正是目前临床上使用最为广泛的金属材料。同时，利用比格犬这类口腔环境与人类似的动物进行体内实验，得到的实验结果更加可靠。
本研究以佩戴口内金属支架的比格犬的黏膜，毛发，全血和血浆为作为金属离子的检测样本，与自身进行前后比较，探究时间-离子浓度关系。我们使用电感耦合等离子体质谱仪(ICP-MS)来检测金属离子的浓度，因为与原子吸收光谱法相比，ICP-MS 校准曲线相对简单，灵敏度高，线性范围宽，这使我们能够测定低水平的离子浓度[56]，并且该方法经过预处理后可同时提取各种金属离子而不相互干扰[53]。
全文总结
本研究将 6 只比格犬分为佩戴 SLM Co-Cr 合金支架组和佩戴 CNC-milled CP-Ti 支架组，每组 3 只。在佩戴金属支架的 0 天，3 天，1 周，2 周，1 个月，2 个月，3 个月，4 个月，5 个月，6 个月对其进行与之接触的上颚部黏膜、血液和毛发样本采集，并通过电感耦合等离子体质谱技术进行金属离子种类和浓度的检测，进行自身前后时间点的对比和相关性分析，分析佩戴数字化成型金属修复体后对口腔黏膜，血液系统和毛发等的金属离子析出水平和代谢过程。得出的研究结论如下：
1. 在比格犬口内佩戴 CNC-milled CP-Ti 支架或 SLM Co-Cr 合金支架均会造成一定的金属离子析出，并能在黏膜组织，毛发组织，全血和血浆内检测到。SLM Co-Cr 合金支架组金属离子析出量远大于 CNC-milledCP-Ti 支架组。
2. CNC-milled CP-Ti 支架组主要析出的金属离子为 Ti 离子，Ni 离子和 Cd离子。该组金属离子总浓度存在时间依赖性。佩戴支架 1 个月时，黏膜组织内金属离子总浓度到达高峰值；2 个月至 4 个月时，全血
