rhBNP对心肌梗死后心肌细胞病理学和细胞凋亡的研究分析
摘要：目的:观察rhBNP对大鼠心肌梗死后心肌细胞病理学和细胞凋亡的影响。方法:建立大鼠心肌梗死模型，分为MI对照组代发论文 price.51lunwen.org和BNP治疗组。治疗组给予rhBNP连续静滴4周，治疗48h、1、2、3和4周时处死大鼠，进行心肌组织切片HE染色TUNEL法测心肌细胞凋亡指数MAI，免疫组化测Fas与FasL蛋白阳性染色指数。结果:治疗组MAI和Fas/Fasl蛋白阳性率与对照组比较下降有显著性差异(P＜0．05)。结论:连续给予rhBNP能够通过减少MI后心肌细胞凋亡保护缺血心肌，达到改善心功能的目的。
关键词：心肌梗死;重组人脑利钠肽;病理学;凋亡;大鼠
脑利钠肽(brainnatriureticpeptide，BNP)是由32个氨基酸残基组成的17环状多肽，BNP通过与其受体结合，从而介导一系列生理学效应，可以明显改善心功能。重组人脑利钠钛(rhBNP)，被美国FDA批准为急性失代偿性心力衰竭治疗的一线用药，它的另一个治疗应用前景为心肌梗死后的早期治疗。有研究表明rhBNP对AMI左室重构有利［1］但对于心肌梗死后持续应用rhBNP的疗效观察少有报道。本研究旨在观察MI后持续应用rhBNP对大鼠心功能及血流动力学的影响，为寻求新的治疗方法提供依据。
1材料与方法
1．1实验材料
1．1．1实验药物:治疗组以冻干rhBNP(商品名:新活素，0．5mg/支)15μg/kg连续静脉滴注4周，对照组以等体积生理盐水作同期对照。
1．1．2实验动物及分组:选用健康SpragueDawle大鼠100只，广西疾病控制中心动物实验室提供术后24h模型制作成功后，随机分为MI对照组和BNP治疗组，每组50只;每组再各分为术后48h、12、3和4周5个亚组，每组10只。
1．2实验方法
1．2．1大鼠心肌梗死模型制备:参照文献［2］，大鼠水合氯醛麻醉，以0号线结扎冠状动脉左前降支根部。开胸时间不超过30s。应用青霉素腹腔注射预防感染。冠状动脉结扎术后24h存活且心电图符合心肌梗死改变的大鼠作为心肌梗死模型大鼠。1．2．2心肌组织切片制备:分别于术后48h、1、2、和4周，检测血流动力学改变和心脏B超后处死切取约3mm心肌组织，甲醛固定，石蜡包埋切片HE染色后光学显微镜下进行组织病理学观察。
1．2．3检测心肌细胞凋亡:原位末端标记法(TUNEL法)测定心肌细胞凋亡指数(myocardialap-optosisindex，MAI)，具体步骤按试剂盒说明进行。切取石蜡切片，在光学显微镜下计数凋亡心肌细胞数与心肌细胞总数。MAI=凋亡心肌细胞数/心肌细胞总数×100%。
1．2．4检测Fas与FasL蛋白阳性染色指数:取石蜡包埋的心尖部组织切片，采用免疫组化ABC显色法，胞膜或胞浆呈棕黄色为阳性表达，以平均计数阳性细胞核数所占的百分比作为Fas与FasL蛋白阳性染色指数。
1．3统计学方法:采用SPSS11．0统计学软件进行处理。计量资料以(x珋±s)表示，组间比较采用独立样本t检验。
2结果
2．1在实验的4周内，100只大鼠共有7只死亡，对照组3只、治疗组4只考虑死于心力衰竭，最终获得完整资料大鼠93只。
2．2HE染色检测大鼠心脏组织病理学改变(见图1):治疗4周后2组梗死区心肌细胞、炎性细胞消失，成纤维细胞、内皮细胞略增多。对照组坏死区域扩大，形成瘢痕区，梗死边缘区心肌细胞坏死范围与正常组织界限不清。治疗组坏死区域及形成的瘢痕区较对照组小，梗死边缘区与正常组织界限较对照组清晰。
2．3两组大鼠不同时间心肌细胞凋亡结果的比较:治疗组MAI在3、4周与48h比较下降有显著性差异(P＜0．05)，4周时治疗组与对照组比较明显下降(P＜0．05)。Fas/FasL蛋白论文网 http://www.51lunwen.org阳性率在对照组中4周与48h比较下降明显(P＜0．05);治疗组2、3、4周与48h比较降低有显著性差异(P＜0．05)，与对照组比较下降也有显著性差异(P＜0．05)，见表1。
3讨论
近来研究表明，MI后心肌坏死与细胞凋亡共同导致心肌细胞数量减少，且心肌凋亡的持续存在使心肌细胞进行性丢失，导致室壁变薄，心室扩张，梗死区心肌变薄，非梗死区心肌肥厚，最终发展为心力衰竭［3］。国外研究发现［4］，心功能受损时内源性BNP浓度增加，虽然内源性BNP是一种代偿性的心脏保护激素，但其浓度升高不足以完全拮抗体内过度激活的神经内分泌系统。这时补充外源性BNP能够调整体内的神经内分泌水平，保护心脏功能。李世强等［5］研究发现，对急性心肌梗死伴心力衰竭的患者静滴rhBNP较硝酸甘油有更好的血流动力学效应和临床效果，且安全可行。
目前认为细胞凋亡参与心肌梗死的病理过程，是心肌梗死范围扩大和引起左心室收缩功能降低及早期重塑的重要因素［6］。本研究结果显示，心肌梗死后连续给予rhBNP4周与应用生理盐水的MI大鼠相比，心肌梗死面积缩小、非梗死区心肌细胞凋亡减少，TUNEL法检测心肌细胞凋亡率明显下降，两组比较有显著性差异(P＜0．05)。另外，Fas/FasL系统是公认的与凋亡密切相关的调控蛋白，在细胞凋亡的发生发展过程中起关键作用［7］。本研究结果亦显示，应用rhBNP能够使Fas/FasL表达减少，与对照组比较有显著性差异(P＜0．05)，说明连续给予rhBNP4周能够通过影响MAI和Fas/FasL的表达，保护心肌细胞，减少细胞凋亡，改善心功能。
综上所述，连续给予rhBNP能够通过减少MI后心肌细胞凋亡，从而达到保护缺血心肌、减少心肌有效工作细胞进一步丢失、改善心功能的目的。近年来，随着其药理作用帮写论文 price.51lunwen.org及临床应用研究的不断深入，rhBNP被越来越多地应用于急慢性心力衰竭的治疗，并取得了大量成果，有望成为心血管疾病新的重要治疗药物。
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