前言
1中药复方药代动力学研究概况
中药复方是传统中医用药的主要形式,己有二千多年的历史。整体性、复杂性是中药复方的主要特征,由于多成分、多IE点、多效应的复杂性及传统中医理论的整体性使得中药复方的研究困难重重,是我国中医药现代化研究的重点和难点[1]。随着科学的进步与发展,应用现代科学方法和先进技术手段深入研宄中药复方的药动学,明确复方的作用基础及配伍的科学内涵,成为了发展中医药现代化的的趋势。
中药复方是由多味中药根据君臣佐使的配伍规律组合而成,所含成分十分复杂。通常我们认为中药复方复杂的化学成分中能够发挥作用的是进入人体内的中药来源的成分,可能包括中药的原型成分及其代谢产物。对复方服药后入血成分的_定,进行药动学研究,可为中药复方的效应物质基础的研究提供信息和指导,是复方研究的必经之路药物动力学旨在阐明药物在体内吸收、分布、代谢、排泄的过程,所得的药动学参数对于药物的设计研究及临床应用均具有重要意义[3]。复方中药物的体内过程十分复杂,各个化合物可能存在各自的代谢特点,包括吸收的快慢、分布的不同及代谢的差异等。因此了解中药复方的体内过程对于提高药物的有效性、安全性及可控性有重要作用,是临床合理用药的重要保证。目前中药复方药动学的主要研究方法包括有生物效应法和血药浓度法。
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2课题研究背景
中药复方麝香保心丸历史悠久,1972年上海华山医院戴瑞鸿教授在宋代《太平惠民和剂局方》中的名方苏合香丸基础上进行改良,展开了麝香保心丸组方的研制工作,最终研制成功现代中药复方制剂麝香保心丸。该复方能快速缓解胸闷、胸痛症状,是临床上应用时间最长的冠心病治疗药物之一[7]。己有大量研究表明慶香保心丸治疗冠心病心绞痛疗效确切,比传统西医常规治疗的疗效更为显著[8-1°],受到了广大医生和患者的欢迎。麝香保心丸是由麝香、膽酥、人参、苏合香、肉桂、牛黄、冰片七种中药组成,能够降低心肌耗氧量、提高心肌收缩力、改善心肌缺血状况、增加冠状动脉血流量、抑制粥样动脉硬化,其作用机理包括:(1)对血管的保护作用:保护血管内皮作用["]及抑制血管壁炎症[12]; (2)促进治疗性血管新生作用[13]: (3)稳定易损斑块作用[14]。近年来,廣香保心丸在血管新生研宄、循证医学研宄和系统生物学研宄等方面取得了众多成果,极大地推动了中药现代化事业的发展。
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第一章小鼠的血装及组织样品中蟾餘留二赌类成分的LC-MS/MS含量测定方法的建立
在中药复方中有些身分含量较低,血及构造中的含量更低且滋扰因素浩繁,以致于难以检测,为其药动学的研宄带来了很大的困难。近十年来液相色谱-质谱联用要领日趋成熟,遍及地应用于药动学研宄中。该要领将高效液相色谱的高分散性能与质谱的高选择性及高敏捷性相联合,降服了阐发时间长、敏捷度不高等缺陷,是现在最紧张的分散阐发要领之一。在蟾餘留二煤类身分的药动学研究报道中,Zhang等[26]应用UPLC-MS/MS要领同时测定大鼠血衆中三种蟾蜍留二稀类化合物,Xu等[27]创建一种同时测定大鼠血楽中的五种蟾餘留二稀类化合物的LC-MS/MS要领,以上要领的阐发时间较短且最低定量限均为1 ng/mL,具有较强的敏捷度。相比于血装,化学身分在构造中的基质滋扰更大,而在构造中同时定量多种蟾餘留二稀类身分则几无报道。
本实验建立了一种快速、灵敏的LC-MS/MS方法,同时定量小鼠血装及组织中酯蟾毒配基、蟾毒灵、日_毒它灵、沙蟾蜍精及_毒它灵五种!?餘留二炼类化合物,并经过方法学验证以用于该化合物的体内药物动力学及组织分布研究。
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1材料与试剂
1.1仪器
安捷伦1200高效液相色谱系统,包括二元梯度菜、在线真空脱气机、自动进样器、柱温箱及DAD检测器(Agilent Technologies,美国);6410A三重四级杆质谱检测器,配备ESI电喷雾离子源,B.03.01版本MassHunter工作站米集和处理数据(Agilent Technologies,美国);ACQUITY HSS T3 C18 色谱柱(100 x 2.1 mm I.D.,1.8 , waters,美国);勾衆机(IKA,德国);BP211D十万分之一电子天平(Sartorius,德国);Milli-QSO SP 纯水系统(Millipore,美国);UNIVERSAL32R 台式冷冻离心机(Hettich,德国);VX200润旋振荡器(Labnet Inemational,美国);真空挥干仪(Labconco,瑞士)。
1.2药品与试剂
酷蟾毒配基(Resibufogenin)、蟾毒灵(Bufalin)、替销挫(Tinidazole)标准品购自中国药品生物制品检定所;日瞻毒它灵(Gamabufotalin )、沙蟾餘精(Arenobufagin)、_毒它灵(Bufotalin)标准品购自上海鼎瑞化工有限公司,以上标准品的纯度均大于98% (结构见图1-1)。肝素钠购自国药集团化学试剂有限公司。麝香保心丸制剂(批号120716)由上海和黄药业提供。
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第二章 麝香保心丸中蟾蜍甾二烯类成分的药物动力学与组织分布研究............. 41-51
1 材料与试剂............... 41-42
1.1 仪器 ...........................41
1.2 药品与试剂 ................41-42
2 实验动物 ...............42
3 实验方法 ............................42-43
3.1 麝香保心丸的含量测定............................. 42
3.2 药物动力学研究 .............42
3.3 组织分布研究............. 42-43
3.4 药动学分析 ..............43
4 实验结果与讨论 ................43-50
4.1 药物动力学研究............ 43-46
4.2 组织分布研究.................... 46-50
5 本章小结
本章应用建立的LC-ESI-MS/MS方法研宄小鼠口服廢香保心丸后五种膽餘留二條类化合物的药物动力学及组织分布。药动学研究中发现醋幢毒配基、蟾毒灵、日膽毒它灵、沙膽餘精及蟾毒它灵在小鼠体内均快速吸收且消除速率较快。其中蟾毒灵的G,《a和AUGM最大,可能与其给药剂量较高有关,而擔毒它灵的最大血药浓度远小于其给药剂量,该化合物表现出极低的生物利用度。所有成分的药-时曲线均出现双峰现象,可能是由于小肠的重吸收导致的。组织分布研究中发现各化合物快速且广泛地分布于各大组织,主要分布于为肺、肾及肝,且长时间无蓄积。与其他成分相比,日瞻毒它灵在肝中有较高的蓄积,可能是由于成分间相互作用所致。所获得的药动学及组织分布结果对于麝香保心丸的临床应用有一定的指导意义,所提供的科学数据对麝香保心丸进一步的研究具有一定的参考价值。
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结论
本课题首次研宄了靡香保心丸中瞻蜍留二炼类成分在小鼠体内的药物动力学及组织分布,选用小鼠作为实验动物,比大鼠更能反映药物在人体内的动态变化。蟾餘留二煤类成分是廢香保心丸中发挥强心作用的重要成分,同时该类成分也具有很强的毒性。因此研究该类成分在体内的药物动力学及组织分布对于药物临床应用的有效性与安全性具有十分重要的意义。
首先我们建立了一种快速、灵敏的LC-ESI-MS/MS方法,同时定量小鼠血衆及组织中五种蟾穌留二炼类成分,包括峻毒灵、醋膽毒配基、膽毒灵、日膽毒它灵、沙膽餘精及膽毒它灵,并从选择性、线性、LLOQ、精密度、准确性、提取回收率、基质效应及稳定性方面进行方法学验证,其结果均符合FDA对生物样品的要求,成功地应用于小鼠口服麝香保心丸后的药物动力学与组织分布研究。在麝香保心丸的药动学研究中我们发现,膽餘留二煤类成分具有吸收快的特征,且快速广泛地分布于各大组织中,这可能与麝香保心丸快速发挥强心作用相关。该类化合物大部分消除较快,且在各个组织中均无长时间的累积,说明麝香保心丸用药安全可靠。以上所获得的药动学及组织分布数据为磨香保心丸的临床用药有效性及安全性提供依据,为其复方药效物质基础的研究提供信息和指导。
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参考文献(略)