套式PCR检测唾液中变形链球菌及远缘链球菌差异

优点[11]。唾液中抽提的DNA中肯定含有别的微生物的DNA及人类染色体DNA,但Matto等[10]证实,只要靶细菌引物具有特异性,唾液中其他成分的DNA并不干扰靶细菌DNA模板的PCR反应。本研究引物的选择是基于变形链球菌产生3种葡糖基转移酶(glucosyltransferase,GTF),GTF-I、GTF-SI、GTF-S;远缘链球菌产生4种GTF-GTF-I,GTF-S,GTF-SA,GTF-SB。其中变链菌gtfI基因与远缘链球菌gtfB基因编码的GTF-I能合成非水溶性葡聚糖,发挥重要致龋作用,而且gtfB和gtfI基因中有种属特异性核苷酸序列[12],因此根据gtfB和gtfI的特异性核苷酸序列分别对应模板的内侧及外侧设计内、外两对引物,只有当模板DNA与内、外引物均配对互补时,才能得到套式PCR最终的产物。本研究表明,唾液中其他成分DNA并未与变链菌和远缘链球菌DNA发生交叉反应。在变形链球菌群中变链菌的检出率最高,远缘链球菌的检出率不及变链菌,常在检出变链菌的个体中检出,两种细菌的协同作用可能比单独作用对龋病影响更大。但Hirose等[3]的研究提示,与变链菌相比,远缘链球菌可能与龋病发生和活跃性关系更密切。近来Radford等[5]发现苏格兰龋患人群口腔中变链菌的量明显大于非龋患人群;而远缘链球菌的量在两种人群中无明显差异。目前对变链菌和远缘链球菌与龋病发生关系的研究尚存在争议。因此,鉴定变链菌和远缘链球菌,研究人类口腔中这两种细菌检出率的差异,对探索两种细菌与龋病关系有重要意义。本研究运用套式PCR在7 h