Abstract : A post2column derivatization system and ligand exchange mode were used for the sensitive and selective determination of degradation sugar s in food. The linearity , limit of detection (LOD) and repeatability of six sugar s have been evaluated. This met hod has been used for the determination of degradation sugars in pickles juice wit h satisfactory result s.
糖类作为生物的能源,具有重要的作用。因此它的检测,也受到人们的重视。目前采用最广泛的分析手段是高效液相色谱法。由于分离的目的不同,所以在液相色谱上开发出多种分离方法,例如,空间排斥色谱法、分配色谱法、配位体交换色谱法和阴离子交换色谱法等。而在检测手段上则多用示差折光检测器。因为这种检测器选择性差、灵敏度低,不适用于低浓度、复杂基底的样品分析,所以,又开发出了多种糖类的柱后衍生系统。
岛津公司为方便用户,也开发出以精氨酸为柱后衍生剂的降解糖分析系统。该柱后衍生法可与多种分离方法结合,共同完成降解糖的分离与检测。本文以配位体交换色谱法为例,介绍了新开发的降解糖柱后衍生荧光检测系统。
1 实验部分
1. 1 仪器与试剂
岛津降解糖分析系统(见图1) ,主要包括:在线脱气机DGU220A5 一台,输液泵LC220AD 两台,柱温箱CTO220A 一台,荧光检测器RF210AXL 一台,自动进样器SIL220AC 一台,及配位体交换色谱柱Shim2pack SCR2101C(300 ×7. 9 mm i. d. ) 一根。
蒸馏水;精氨酸,生化制品,SIGMA 公司;硼酸,氨基酸分析用,和光纯药工业株式会社;麦芽三糖、蔗糖、葡萄糖、半乳糖、果糖、核糖、树胶醛糖,特级,和光纯药工业株式会社。
1. 2 实验条件
分离条件:流动相:蒸馏水,流速:0. 8 mL/ min ,温度:80 ℃。
检测条件:激发波长320 nm ,发射波长430 nm。
衍生条件:衍生液:1 %L2精氨酸,3 %硼酸;流速:0. 5 mL/ min ;反应温度:150 ℃。
1. 3 样品处理
酱菜汁经0. 45μm 的膜过滤后,直接进样10μL 。
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2 结果与讨论
2. 1 标准品的分析
分别配制12. 5μg/ mL 、25μg/ mL 、50μg/ mL 、100μg/ mL 的标准品,依次进样10μL ,得到6 种降解糖组分的工作曲线,并根据3σ计算方法的检出限(见表1) 。所有组分的相关系数都达到3 个9 以上,检出限在16. 6~135. 3 pmol 之间。
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用25 ppm 的标准品连续进样6 次,每次进样10μL ,以获得该方法的重现性,结果见表2 、表3 。其中,保留时间的重现性(RSD %) 最小值为0. 006 ,最大值为0. 052 ;峰面积的重现性(RSD %) 最小值为0.933 ,最大值为4. 771 。
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2. 2 实际样品分析
图1 为6 种降解糖标准的色谱图。采用上述实验条件及前处理方法,对酱菜汁中的降解糖进行了测定,结果见表4 和图3 。保留时间5. 912的峰在麦芽三糖前出,为酱菜汁中的多糖。本次实验依据保留时间定性,依据外标曲线和峰面积定量。
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3 结论
柱后缓冲电导检测法的线性、重现性都表现出了良好的结果,检出限适合食品样品中低浓度、复杂基
底的样品分析。