1材料与方法
1.1标本来源
事实上,乳腺癌具有异质性的特点,很难应用传统的组织学特点及ER､PR表达状态来评估所有的乳腺癌,因此一些新的生物学标记受到关注,雄激素受体(AR)就是其中之一｡
134例IDC组织芯片,购于上海芯超生物科技有限公司,编号HBre-Duc140Sur-02,随访5.6~9.9年｡未经过放疗､化疗｡试剂浓缩型鼠抗人雄激素受体(AR)单克隆抗体购自广州深达生物制品技术有限公司,工作浓度1∶100｡(1)在乳腺IDC中AR阳性的表达率为61.94%(83/134),组织学分级Ⅰ级为100%(3/3)､Ⅱ级为71.76%(61/85)､Ⅲ级为38.10%(16/42),其MOD值分别为0.38､0.26和0.12｡AR的表达与组织学分级呈负相关(P<0.05),即AR表达量越高,组织学分级越低;与年龄､肿瘤大小､淋巴结转移及TNM分期无相关性(P>0.05)｡(2)Kaplan-Meier生存曲线示乳腺IDC中AR阳性患者生存期较AR阴性患者生存期长(P<0.05)｡
(1)AR表达可反映乳腺IDC的分级,AR表达越高,其组织学分级越低｡(2)乳腺IDCAR阳性者生存期长,预后好｡
1.2方法
将134例浸润性导管癌组织芯片进行免疫组化EnVision二步法染色｡具体操作步骤严格按试剂盒说明书进行,DAB显色,苏木精复染,脱水,透明封固,镜下观察｡
1.3结果判定
采用半定量分析法并按标准进行结果判定｡(1)乳腺癌AR阳性的标准:蛋白表达定位于细胞核,无着色或<1%着色为阴性､≥1%着色为阳性｡(2)AR的平均光密度值评定:将每例组织的染色结果在镜下分为4个视野并依次截取图像,应用美国MediaCybemetics公司开发的Image-ProPlusVersion6.0(IPP6.0)分析图像平均光密度值(MOD)｡
1.4统计学处理
采用SPSS17.0统计软件,各组间AR表达的比较采用χ2检验,关联分析采用Spearman相关分析;AR与生存期的关系采用Ka-plan-Meier生存曲线,用LogRank(Mantel-Cox)和Breslow两种检验方法进行统计学处理｡
2结果
2.1AR在乳腺癌组织中的表达
AR阳性信号呈浅棕色至深棕色或棕黄色颗粒位于细胞核(图1~3)｡134例IDC中AR阳性表达率为61.94%(83/134),病理组织学分级Ⅰ级､Ⅱ级､Ⅲ级的AR阳性表达率分别为100%､71.76%､38.10%,经统计分析,差异有统计学意义(P<0.05)｡由此可看出,随着癌组织分化程度降低,AR的表达率逐渐降低｡AR的表达强度在组织学分级Ⅰ级､Ⅱ级､Ⅲ级中的MOD值分别为0.38､0.26和0.12,经统计分析,差异有统计学意义(P<0.05)｡由此可见,随着组织学分级升高,AR的表达含量逐渐减弱,即肿瘤分化程度越高,其AR的表达含量越高｡
乳腺IDC患者年龄33~88岁,平均59岁,其中≤50岁AR阳性率为56.41%(22/39),>50岁AR阳性率为64.21(61/95),经χ2检验,二者无差异(P>0.05)｡MOD值分别为0.21和0.22,经相关性分析,AR表达含量与年龄无相关性(P>0.05)｡肿瘤直径≤2cm的患者AR阳性率为72.97%(27/37),直径2~5cmAR阳性率为57.89%(44/76),直径≥5cmAR阳性率为63.16%(12/19),差异无统计学意义(P>0.05)｡MOD值分别为0.25､0.21和0.23,经相关性分析,AR表达含量与肿瘤大小无相关性(P>0.05)｡
134例乳腺IDC中,有129例有淋巴结转移与否的资料,其中发生淋巴结转移患者的AR阳性率为60.94%(39/64),未发生淋巴结转移患者的AR阳性率为63.08%(41/65),差异无统计学意义(P>0.05)｡MOD值分别为0.22和0.22,经相关性分析,AR表达含量与淋巴结转移率无相关性(P>0.05)｡TNM分期为Ⅰ期的AR阳性率为78.26%(18/23),Ⅱ期的AR阳性率为61.33%(46/75),Ⅲ期的AR阳性率为57.58%(19/33),差异无统计学意义(P>0.05)｡MOD值分别为0.26､0.22和0.22,经相关性分析,AR表达含量与TNM分期无相关性(P>0.05)｡
134例IDC中,死亡40例,其中19例呈AR阳性表达,21例呈AR阴性表达｡存活94例,其中64例呈AR阳性表达,30例呈AR阴性表达｡5年生存率为74.63%,其中AR阳性的5年生存率为81.93%,而AR阴性的为62.75%,两者差异有统计学意义(P<0.05),说明AR阳性的乳腺IDC患者的5年生存率高于其AR阴性者｡
根据Kaplan-Meier生存曲线,结果显示在134例IDC中,AR表达阳性患者的生存期与其AR表达阴性患者间的差异有统计学意义(P<0.05),说明乳腺浸润性导管癌中AR表达阳性的患者较AR表达阴性的患者生存期长,预后好｡在88例IDCⅠ~Ⅱ级中,AR表达阳性患者的生存期与其AR表达阴性患者间差异有统计学意义(P<0.05),而在42例IDCⅢ级中,AR表达阳性患者的生存期与其AR表达阴性患者间差异无统计学意义(P>0.05)｡
3讨论
本研究表明,在乳腺IDC中AR的表达与年龄､肿瘤大小､淋巴结转移及TNM分期无关,而与IDC的组织学分级有关｡近年采用免疫组织化学证实,人乳腺癌组织和乳腺癌细胞株中均存在AR异常分布,AR阳性表达率约为40%~80%,与ER､PR表达相当甚至更高｡Hu等研究显示乳腺癌中AR阳性表达率为77%,ER阴性乳腺癌中为65%,而在三阴性乳腺癌中则超过50%｡
Yu等研究表明,335例乳腺癌患者的AR阳性表达率为72.5%,其中激素受体阴性者为53.2%｡由此可见上述结果不尽一致,其原因可能是检查方法､技术条件及阳性判断标准不一致所致｡尽管如此,在乳腺IDC中AR表达是一个常见的特征｡本研究通过乳腺癌组织芯片资料显示,在134例IDC中,AR阳性率为61.94%;随着IDC分级的增高,AR阳性表达率逐渐下降,表达强度也逐渐下降｡说明分化高､恶性程度低的IDC,其AR表达高;分化差､恶性程度高的IDC,其AR表达低或缺失｡Gasparini等结果显示,与ER阳性的乳腺癌患者比较,三阴性乳腺癌患者AR表达更低,同时AR的表达与肿瘤分级呈负相关｡可见AR的表达可反映IDC的分化程度和恶性程度,可作为临床判断预后的又一指标｡
研究表明,AR表达阳性率越高,组织学分级越低,肿瘤直径越小,淋巴结受累数目越少,且与ER､PR阳性表达呈正相关,而大部分研究未发现AR表达与年龄､临床分期等临床病理特征有关｡
有研究显示AR的表达与年龄､肿瘤大小､淋巴结转移､组织学分级以及HER-2无关,而与ER和PR有关;而Ogawa等应用免疫组化法检测227例原发性乳腺癌中AR的表达,发现越小的肿瘤AR阳性率越高｡部分研究结果的不一致,如AR表达是否与ID
