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第 4 章 PCV2 Cap-CRT 融合蛋白的制备和免疫原性分析
猪圆环病毒（Porcine circovirus，PCV）是目前已知的最小的动物病毒，属于圆环病毒科圆环病毒属成员，呈现二十面体对称的环装结构，病毒粒子直径大约 20 nm。PCV 存在两个基因型，PCV1 没有致病性；PCV2 可以引发 PMWS、PDNS、PRRS、仔猪先天震颤以及其他 PCV2 相关性肠炎等多种疾病，给养猪业带来重大的经济损失。
PCV2 基因组中，最重要的为 ORF2 编码病毒的唯一结构蛋白（Cap 蛋白）。该蛋白能够构成病毒的核衣壳，并且能够识别宿主的受体细胞，是病毒主要的免疫原性蛋白，能够刺激机体产生抗体。由于圆环病毒的抵抗性较强，感染猪群年龄跨度较大，猪场很难将其完全净化，预防该病的手段依然是疫苗接种。国外已上市的亚单位疫苗有 3 种，分别是勃林格公司的 IngeIvacCircoFLEX?，英特威公司的 Circumvent?以及先灵葆雅公司的 Porcilis?PCV，三种疫苗均以杆状病毒表达的 Cap 蛋白为靶标制备的亚单位疫苗。
前文截短 CRT融合外源基因 FMDV VP1 蛋白在大肠杆菌中的表达已经取得进展，成功实现了 VP1-CRT 融合蛋白的可溶性表达，并成功自聚形成了多聚体，反应原性与免疫原性均良好。为了验证该策略是否能够在其他病原体的相关基因上应用，继续选择 PCV2 的 Cap 蛋白验证该 CRT 融合蛋白表达模型的有效性，为 PCV2 亚单位疫苗的研究奠定基础。本研究也将采用遗传背景清晰，操作简便产量高大肠杆菌表达系统，但是由于缺少翻译后的修饰作用，常会收到包涵体的限制，本试验也将力求实现了 Cap 蛋白的可溶性表达，为后期疫苗的制备奠定基础。同时，采用前期分离培养的 PCV2 DF-1 毒株对试验动物进行攻毒保护试验，验证制备的 Cap-CRT 融合蛋白能否有效保护机体。
参考文献（略）
