第一章文献综述
1.耗牛的分类、分布地域及其适应高原环境的生物学特征
1.1牛毛牛的分类学地位
野耗牛和家耗牛的科学命名及动物学分类地位，许多研究人员提出不同的观点，根据国际自然和自然资源保护联盟编的《红皮书》，将野耗牛的的拉丁名定为Bos mutus，家耗牛的拉丁名定为Bos grunniens。按照当代动物学分类
2牛毛牛的分布地域
耗牛生活在高海拔，高寒，饲草短缺的高原地区。以我国青藏高原为中心，围绕喜马拉雅山、帕米尔、昆仑山、天山、阿尔泰山等几大山脉向外延伸的地区都有耗牛的分布。中国的耗牛分布在青海省、西藏藏族自治区、四川省、甘肃省、新疆维吾尔族自治区和云南省，中国的耗牛数量占世界耗牛总数的92%
1.3牛毛牛适应高原环境的生物学特征
1.3.1对高寒环境的适应性特征
1.3.1.1身体结构
皮肤面积的大小，对家畜散热力影响较大。为了适应高寒地区恶劣的气候条件，耗牛在长期自然选择的过程中形成了体格大、体质结实紧凑，脖子、四肢和尾巴相对较短，耳朵和垂皮小，体表褶皱少，相对体表面积小(耗牛每1千克活重的体表面积为0.0182m等特征，这些特征有利十耗牛保存体内能量。
1.3.1.2被毛组成
长而密的被毛是动物适应极端寒冷环境的重要保障。耗牛全身长着长而密的被毛，尤其在身体凸出部位、腹部和臀部的被毛更长，像“围裙”一样，保护这些部位(包括内脏)免受冻害，雄性耗牛的阴囊和雌性耗牛的乳房周围也被厚厚的被毛覆盖，到目前为止，没有发现耗牛有冻伤的报道。耗牛的被毛是由不同类型的纤维组成的混型被毛，目_毛纤维中绒毛含量高，阻止体热散失的性能高。
1.3.1.3皮肤和汗腺
家畜皮肤的厚度，直接关系到机体的热调节机能。耗牛的皮肤平均厚度为6.2mm，均大十欧洲牛和瘤牛。据报道，与中甸黄牛和中甸蝙牛相比，中甸耗牛具有更厚的皮肤耗牛的真皮层及其下面的脂肪层发育较好，容易沉积皮下脂肪，脂肪层是热的不良导体，能防止体热过度的散发。由十长年生活在高寒的环境中，耗牛背部更易受到雨雪的侵袭，因此其背部的皮肤显著厚十其他部位的皮肤。李诗洪等通过测量耗牛肩部、背部和膝盖部位的皮肤厚度，发现这二个部位的平均皮肤厚度分别为，5.6+0.36mm, 7.5+0.83mm，5.6+0.40 mm。欧日熙等通过组织切面测量耗牛皮肤厚度，发现耗牛背部皮肤的平均厚度为5.13mm,而被毛密集部位皮肤的厚度只有2.36mm，全身平均皮肤厚度为3.37+1.38mm,其中表皮的厚度仅有0. 044+0.019 mm
耗牛的汗腺呈弯曲的小管，在组织切片上呈小球和小线团状，而普通的牛的汗腺粗大，呈袋状。通过组织学观察发现，耗牛鼻镜、面部、颈部、腋下、背部、腹侧、腹下部、臀部、股内侧等均有汗腺分布。在1 mm2的组织切片上，耗牛平均有汗腺导管9.3个，导管直径为0.0765mm; 而黄牛平均有13.5个汗腺导管，其导管直径为0.0855mm。说明耗牛汗腺发育不如黄牛。因此耗牛皮肤的厚度和汗腺的分布决定了其耐寒惧热的特点。
1.3.1.4能量代谢
细胞呼吸是ATP的主要来源，为机体的各种活动提供能量并产生热量，从而维持动物体温恒定。高原动物对低氧适应还表现在呼吸链酶学特征和线粒体结构、大小和数目的变化上。与平原牛相比，高海拔地区(4200m)的耗牛心线粒体数目增加40%。高海拔地区耗牛血清中乳酸脱氢酶仗月夕、总过氧化物歧化酶心均显著高十低海拔地区的耗牛，而 MDA则显著低十低海拔地区的耗牛，耗牛LDH-A对丙酮酸的高Km可避免骨骼中产生过多的乳酸
3 牦牛 EPAS1 基因遗传............43-48
3.1 PCR 产物琼脂糖............ 43
3.2 牦牛 EPAS1 基因 ............43-44
3.3 牦牛 EPAS1 基因............ 44
3.4 SNPs 基因型频率............ 44-45
3.5 3个牦牛群体中............ 45
3.6 各群体间基因型频............ 45-46
3.7 连锁不平衡和............ 46-47
3.8 SNP 的中性检验............ 47-48
3.9 候选基因功能的............ 48
4 牦牛 VEGF-A 基因遗传............ 48-54
4.1 PCR 产物琼脂糖凝............ 48
4.2 牦牛 VEGF-A 基因 ............ 48
4.3 牦牛 VEGF-A 基因 ............ 48-49
4.3.1 牦牛 VEGF-A............ 48-49
4.3.2 牦牛 VEGF-A............ 49
4.4 SNPs 基因型频率与............ 49-50
4.5 3个牦牛群体中 SNPs ............ 50
4.6 各群体间基因型频率............ 50-51
4.7 连锁不平衡和单............ 51-53
4.8 SNP 的中性检验............ 53-54
5 牦牛 EPAS1 基因表达............ 54-56
5.1 扩增产物特异性............ 54-55
5.2 EPAS1 基因的组织表............ 55-56
5.3 EPAS1 基因在牦牛和............ 56
6 牦牛 VEGF-A 基因表达规律............ 56-59
6.1 扩增产物特异性检............ 56-57
6.2 VEGF-A 基因的组织表............ 57-58
6.3 VEGF-A 基因在牦牛和高原地区............ 58-59
7 EPAS1 基因和 VEGF-A 基因在牦牛和............ 59-61
第四部分 讨论............ 61-65
1 采样和试验方法............ 61
2 候选基因的 SNPs ............ 61-63
2.1 EPAS1 基因的 SNPs ............ 61-6
