第一章绪论
1.1马铃薯纺锤块茎类病毒概述
1. 1. 1马铃薯纺锤块茎类病毒简介
马铃薯(Solamun tuberoosmn)是人类生活最重要的粮食作物之一。有许多因素影响马铃薯产量的提高，其中最重要的因素是马铃薯易感染很多病害。病害的病原体包括真菌、细菌、线虫、病毒和类病毒。主要的马铃薯病毒包括:马铃薯S病毒CPVS、马铃薯帚顶病毒PMTV、马铃薯A
病毒PVA、马铃薯病毒CPVK、马铃薯卷叶病毒(PLRV)和马铃薯Y病毒(PVY)。类病毒是较少为人所知的易染植物病害。它独特之处在于无外壳、单链、共价闭合以及儿白个核有酸的环状RNA分了(246 to 375，单链环状或双螺旋区域(SLAGER et al. 1976; SLAGER 1982)。类病毒口感染许多重要作物，例如:柑橘、马铃薯、番茄、椰了、鳄梨和装饰性植物菊花等，通常会造成严重减产。由于其世界性分布以及易造成严重农业病害的特点，类病毒可限制主要作物产量(RANDLES2003)。唯一可控制类病毒的方法是找到最佳检测方法，根除感染材料。
马铃薯纺锤块茎类病毒(PSTVd),是一种最重要的马铃薯类病毒，广泛分布在世界各地。1922年(MARTN 1922)我们就己知道它的存在，但是在1967年(DEVER and RAYMER 1967)，式被发现，和其他类病毒一样，PSTVd不能编码千日可蛋白(GROSS et al. 1978)，以及独立复制其他相关植物病毒。PSTVd依靠RNA聚合酶II复(HLBACH and LAGER 1979;RACKWiTZ et al. 1981;GOODMANN et al. 1984; SCHiNDLER and M自HLBACH 1992;NAVARRO et al. 2000)。马铃薯纺锤形块茎类病毒(PSTVd)是一种易感染的无外壳、小型、环状、单链的RNA。它属于纺锤形块茎类病毒科，纺锤形块茎类病毒属。
2马铃薯纺锤块茎类病毒的危害
马铃薯纺锤块茎类病毒在不同的寄主上有不同的变种。PSTVd的天然寄主范围比较窄，最容易被侵染以及造成严重危害的是马铃薯以及茄科植物的甸甸茎和块茎。番茄也易侵染(PUCHTA etal. 1990, VERHOEVEN and ROENHORST 1995)。另外，鳄梨也被发现易侵染PSTVd (PUCHTA et al.1990; QUERCiet al. 1995 ; SHAMLOUL et al. 1997)。因其口一能造成的潜在经济损失，PSTVd是EPPO(欧洲植物保护组织)A2级检疫病害，NAPPO(北美植物保护组织)重点检疫病害。2006年，PSTVd在家庭装饰性茄科植物中检测到但无症状。针对这个发现，很快EU成立一个研究计划，旨在研究PSTVd在茄属装饰植物的发生(特别是茄属和大花曼陀罗属)，建立健康的母本，无PSTVdo令人担心的是装饰植物可作为温室番茄的最初传染源，而无论是番茄还是马铃薯因机械和昆虫携带而产生的传染是无法避免的(SALAZAR et al. 1995, SYLLER et al. 1996 QUERCiet al. 1997,SNGH and KURZ, 1997)。被感染植株的剪枝是最常见的传染途径，PSTVd通过栽培过程传播也是很普遍的。因此，被污染的机械具、花盆等以及基质和水都要注意。至今，关于PSTVd如何从茄科装饰植物传播到其他物种的报道还很少。因此，在进行温室中实验，评估PSTVd从茄属植物机械传播到番茄的风险。另外调查通过污染的水或植物残渣土壤传播的可能性。1988一1990在北美由PSTVd感染而引起的减产己达197850吨，而由块茎外形差而引起的品级降低也造成巨大损失(RANDLES 2003)。块茎重量的降低与品种和感染时期有关。块茎感染第一年后重量降低46%,第一年87%，第二年则到97% (PFANNENSTiEL and SLACK 1980)
PSTVd感染茄科植物后的典型症状为:抑制生长、叶片畸形、块茎畸形。然而，2006年发现一些观赏茄科被PSTVd侵染后则无典型症状，我们需更加努力发展完善其诊断程序。马铃薯纺锤块茎病是由类病毒(Viroid)引起的病害。此病害分布十分广泛。严重影响马铃薯的产量和品质。据报道，PSTVd强系可导致减产达60%,弱系减产约20%一35%,‘常造成较大经济损失。马铃薯纺锤块茎病是危害我国北方马铃薯生产和实生种了(TPS)品质的重要病害，是我国种薯生产和实生种了利用中履待解决的主要问题。克新2, 3, 4号、紫花白等都发现有不同程度感染。马铃薯纺锤块茎病对我国马铃薯产量的影响，随着病原株系和马铃薯品种不同而异。马铃薯种薯退化的主要原因是感染病毒病和类病毒，病毒是造成马铃薯品质下降和产量降低的主要原因。马铃薯纺锤块茎类病毒是世界上一类检疫病害，对于严格的植物检疫而言，类病毒是相当重要的，它也是育种和遗传资源保存中的一种棘手的病原。大川中，PSTVd可以造成严重减产，在中国，一些感病的地方品种的减产幅度高达80% PSTVd和其他病毒复合侵染可能引起更严重的病害。如受PSTVd和PVY同时侵染，或先感染PSTVd而后又受PVY侵染的一些品种的植株，会表现严重的坏死症状。双重感染的植物中PVY会达到相当高的浓度。
1.2马铃薯纺锤块茎类病毒的研究进展
2. 1马铃薯纺锤块茎类病毒复制机制的研究进展
真核细胞具有高度复杂的亚细胞细胞器及结构用以不同的生化和生物物理反应。在一个细胞器中有很多生化反应区域，所有分了需要精确定位。因此，组织分了运动及定位是活细胞的特征。阐明这些过程的途径及调节机制对了解生命基本原理非常重要。一旦考虑到DNA与蛋白质之间的遗传信息桥梁，RNA在控制细胞反应中扮演着重要角色(Grosshans and Slack, 2002;Storz, 2002; Andersen and Panning, 2003; Greenspan, 2003; Lai, 2003; Masse et al，2003).一个途径是通过4_补的反义碱基对例如micro-RNA的把RNA控制基因的表达(Reinhart et al., 2000;Llave et al.，2002; Kawasaki and Taira, 2003; Masse et al，2003)。最新报道显示，反义RNA常的生产及功能是一种新的基因病害途径(Tufarelli et al, 2003)。不同的途径要求亚细胞RNAs精确定位，其途径还有很多未知之处。
病原体部分或全部要依靠细胞反应来复制，他们必须在亚细胞的特定间隔内进行反应。因此，研究病原体的传染方式对我们了解反应机理有很大的帮助。纺锤形块茎类病毒家族类病毒的复制提供了一种亚细胞RNAs定位的简易模型系统。类病毒是一种自我复制RNAs,可传染植物。它可改变侵染植物生长和发育的重要基因的表达。(2002; Qi and Ding, 2003)。类病毒基因组是一个单链，共价闭合环，无编码以及无外壳保打' RNA, 275到400核有酸。(Hull, 2002)依靠类病毒寄主生存，这些小RNAs高度致病。(Schnolzer et al，1985 ; Owens et al, 1991; De la Pena et al，1999; kori et al，2001;Qi and Ding, 2003)。纺锤形块茎类病毒科细胞核复制，而鳄梨日斑类病毒科在叶绿体复制(Flores et al., 2000)。不编蛋白质，类病毒RNAs必须与细胞反应器相作用以便在亚细胞中准确定位而完成复制功能。复制纺锤形块茎类病毒科模式种马铃薯纺锤形块茎类病毒(PSTVd)是不对称滚环复制.
第二章 材料与方法.......... 15-22
2.1 实验材料.......... 15-16
2.2 实验方法.......... 16-22
2.2.1 Trizol 法提取.......... 16-17
2.2.2 DNaseI (RNase free).......... 17
2.2.3 RNA 的电泳检.......... 17
2.2.4 cDNA 第一链的合成.......... 17-18
2.2.5 PCR 扩增.......... 18-19
