沙漠玫瑰单细胞培养研究

沙漠玫瑰的单细胞培养进行了研究 摘要： 本文对沙漠玫瑰的单细胞培养进行了研究，找出了进行悬浮培养时沙漠玫瑰细胞生长的规律，提出了以获得单细胞培养为目的的各阶段适用的培养基和培养流程，得到沙漠玫瑰的单细胞悬浮系。本研究取得了以下主要成果： 1.叶片愈伤组织的诱导 使用BA1mg/L配合高浓度的2,4-D(1～2mg/L)或BA1mg/L配合低浓度的NAA（0.2～0.4mg/L）培养基黑暗培养沙漠玫瑰无菌叶20天，可获得色泽鲜黄，质地疏松，继代易成活的愈伤组织。 单独使用生长调节剂可诱导沙漠玫瑰叶片产生愈伤组织。使用高浓的NAA（1～4mg/L）或IBA时，在诱导愈伤组织的同时也会诱导形成不定根，出现不定根的愈伤组织已出现细胞的分化，所以不采用单独使用高浓度NAA或IBA的配方。单独使用BA只在高浓度（2～3mg/L）时可诱导产生愈伤组织，但诱导率低，愈伤组织为绿色致密，继代易褐化，所以也不采用此类配方。单独使用2,4-D可诱导产生愈伤组织，但2,4-D与BA配合使用效果更好。 用于诱导愈伤组织的叶片应选叶充分展开期的无菌苗的叶片。芽萌动期的无菌苗叶片或叶速生期的无菌苗的叶片其愈伤组织的诱导率都较低。 2.愈伤组织的继代 由叶片诱导所得的愈伤组织接入MS+2,4-D1～2mg/L或MS+BA0.5～1mg/L+2,4-D1～2mg/L的培养基中继代可获得色泽鲜黄、增殖速度适宜的愈伤组织，且这种愈伤组织经过多次继代后仍能保持这种状态。 叶片诱导的黄色、疏松的愈伤组织直接接入含2,4-D1～2mg/L培养基中可获的增殖速度较快、适于进行悬浮培养的愈伤组织。经过多次继代的愈伤组织接入含2,4-D 1～2mg/L的培养基中培养，继代1～2次后，也能获得增殖速度较快、适于悬浮培养的愈伤组织。 3.细胞的悬浮培养 细胞悬浮培养的起始建立可采用MS+2,4-D1～2mg/L+BA0.5mg/L+LH 300mg/L的培养基。采用MS+2,4-D 1mg/L+BA0.5mg/L+LH300mg/L的培养基时，细胞的生长模型为： y=4.046067-2.290157X+0.272848X2-0.006956X3，R2＝0.8064 由此回归方程可知：细胞的指数生长期在第13.079天结束，细胞的总数量在第20.9天达到最大。因此，细胞培养的继代时间为接入后的第10～13天。 单细胞悬浮培养可采用MS+2,4-D1mg/L+LH300mg/L的培养基，细胞的生长模型为： y=0.434658-0.057224X+0.003858X2-0.000056978X3，R2＝0.9128 由此回归方程可知：单细胞的指数生长期在第22.57天结束，细胞的总数量在第35.79天的最大值。因此，单细胞培养的继代时间为接入后的第18～22天。 悬浮培养时细胞的增殖倍率与细胞的含水率有显著的正相关。 4.建议的单细胞培养的流程 结合本研究的结果，提出以下沙漠玫瑰单细胞培养的配套流程： 叶片愈伤组织的诱导 MS+NAA0.2～0.4mg/L＋BA1mg/L 黑暗培养20天 MS+2,4-D1～2mg/L+BA1mg/L ↓ 愈伤组织的继代 MS+2,4-D1～2mg/L+BA0.5～1mg/L 培养25天 MS+2,4-D1～2mg/L+KT0.5～1mg/L ↓ 细胞悬浮培养的起始建立 MS+2,4-D1～2mg/L+BA0.5mg/L+LH300mg/L 10～13天 ↓ 单细胞的培养 MS+2,4-D1mg/L+LH300mg/L 18～22天 以这个流程计算，培养3个月就可获得沙漠玫瑰的单细胞悬浮系，由此单细胞悬浮系可进行沙漠玫瑰的单细胞繁殖、细胞的生理生化研究，并可进一步进行细胞融合，获得细胞杂交种等等。