内生菌根的培养与研究

内生菌根的培养与研究 摘要：本研究根据内生菌根生长所需营养，制成半合成培养基，对从三叶草根际土壤筛出的内生菌根孢子进行分离培养，得到单菌落；再经扩大培养后，接种桉树、玉米等植物，并栽植于无菌条件下，接种30-80天后，在接种植物根部皮层细胞中观察到内生菌根特有的泡囊和丛枝结构；再从接种植物根部分离到与最初根际土壤分离培养一致的菌根真菌，并可再次侵染玉米等植物。用液体培养液直接接种于植物根部后，亦可观察到有菌丝侵入及泡囊结构。由此表明本试验研制的培养基适合内生菌根的生长，而且能保持其侵染能力。根据柯赫氏法则，本试验内生菌根的培养取得了成功。 单孢分离所得的孢子在平板培养基上培养5-7天后，获得单菌落，菌落白色，表面略有皱褶，背面黄褐色，菌丝生长呈放射状；菌丝无隔，壁薄， 无色直径约3-4μ；10-15天后，在菌落表面长出白色丝状体，簇生，呈重复分枝状，最长可达1.5cm，最粗1-2mm； 15天左右观察可以看到白色丝状体两侧边缘排列大量孢子，孢子形态多样，有圆形、椭圆形、棒状等，但以圆形为多，孢子大小以30-60#mu#为多，最大可达130#mu#，孢子内含物丰富，在丝状体表面还可以观察到大量直径为2#mu#左右的圆形或椭圆形小孢子。 温度对内生菌根培养的影响试验得出，内生菌根在30℃-40℃温度处理后，其菌落生长最好，而在0℃以下温度处理后，其菌落生长最差。肉眼观察可发现培养基表面有黄色和白色两种菌斑，结果表明，内生菌根人工培养的最佳温度在30℃-40℃之间；内生菌根菌在培养过程中，耐热和耐寒能力较强，在0℃、70℃的温度处理后，仍有生长，这个现象为今后大规模生产及远距离运输提供了一个有效的参考依据。 本研究分离培养的内生菌根接种植物后，在其根部及皮层薄壁组织细胞及细胞间观察到泡囊和丛枝两种内生菌根特有的结构，菌丝无隔，说明人工分离培养的内生菌根为VA菌根。本研究分离的内生菌根真菌在土壤中成单生状态，直径95-400#mu#，幼嫩时孢子壁薄而透明，成熟时孢壁加厚，并产生各种饰纹，颜色由淡黄到棕褐，孢子外壁略薄于内壁，孢子内壁黄褐色，形态多样，其中以卵圆形居多，有喙状突起，联孢菌丝单生，两者接合处相通，呈漏斗形。综合以上诸多特征，依据Morton(1990)的分类系统，本研究人工培养的内生菌根真菌属于球囊霉属(Glomus Tul.)，然后根据藏穆（1984）的内囊霉科分种检索表可知该内生菌根为大果球囊霉（G.macrocarpum Tul. et Tul）。 本研究结果表明，将人工培养的内生菌根接种于尾叶桉组培苗、玉米、辣椒、茄子等植物，均具有明显的增效作用，接种植株在株高、根系、生长势等方面均较对照有明显增长，接种3个月的桉苗比对照增高34.2%，地径增加21.1%，根干质量增加29.5%，玉米的产量增加28.57%，茄子产量增加25%,辣椒产量增加54.59%。但该内生菌根对尾叶桉、玉米、辣椒、茄子等的增效作用并不相同，而是存在一定的差别，特别是对辣椒的产量增加达54.59%，对尾叶桉组培苗最大时增高达34.2%；但是对番茄来说，该内生菌根只是增加了番茄的营养生长，而对其产量并没有增效作用。