毛鱼藤酮的提取分离及其生物活性研究

毛鱼藤酮的提取分离及其生物活性研究 当用石油醚、氯仿、丙酮、甲醇等极性不同的系列溶剂提取杀虫植物毛鱼藤根中的有效成分时，以甲醇的提取率最高，但以氯仿提取物对3龄菜粉蝶幼虫的毒杀活性最高。单一的一种有机溶剂并不能完全提尽毛鱼藤根中所有的鱼藤酮类化合物，而以氯仿-甲醇（9：1）混合溶剂提取时，则可以获得较好的提取效果。 用制备型薄层层析板从毛鱼藤根的氯仿提取物中初步分离得到6个鱼藤酮类化合物，其含量均在70％以上。生测结果表明，这些化合物对家蚕的点滴触杀活性以毛鱼藤酮的最高，按其活性从高到低的顺序分别为：毛鱼藤酮、鱼藤酮、灰豆素、鱼藤醇酮、鱼藤素、脱氢鱼藤酮，其中毛鱼藤酮和鱼藤酮对家蚕的LD_(50)分别为80.07#mu#g/头和244.81#mu#g/头。 以活性跟踪法为主要检测手段，以硅胶柱层析法和重结晶法为主要分离方法，从毛鱼藤根中分离出F9-10a、F11-18a 、F11-18b、F19-21a、F19-21b 、F24-26a和F27-31a等7个结晶化合物，通过HPLC法检测和NMR分析证明这些化合物分别为：毛鱼藤酮(F27-31a)、鱼藤酮（F19-21a、F11-18b）、鱼藤素（F11-18a、F19-21b）、脱氢鱼藤酮（F9-10a），F24-26a（待鉴定）。 用高效液相色谱（HPLC）法可以检测到毛鱼藤根中的鱼藤酮类化合物，主要有：鱼藤酮、鱼藤素、毛鱼藤酮、鱼藤醇酮、灰豆素、毛鱼藤醇酮、脱氢鱼藤酮等。经紫外光扫描可以确定，鱼藤酮的最大紫外吸收波长为299nm，而毛鱼藤酮为240nm。在用HPLC法检测毛鱼藤根中的杀虫活性成分时，通过215nm、240nm、2_(50)nm和315nm四个波长同时检测可以看出，毛鱼藤根中的鱼藤酮类化合物在240nm波长下能够获得较好的检测效果。用HPLC法测定毛鱼藤酮在丰顺毛鱼藤 Derris elliptone Benth、肇庆鱼藤Derris hacei Hemsl、密花鱼藤Derris thyrsiflora Benth、毛鱼藤离体倍养物和2.5％鱼藤酮乳油中的含量分别为：0.431％、0.432％、0.021％、0.004％、0.416％，鱼藤酮的含量分别为：3.662％、0.034％、0.127％、0.021％、2.496％。 大多数鱼藤酮类化合物具有旋光性，测得鱼藤酮、毛鱼藤酮、鱼藤醇酮的比旋光度分别为-81.3、-56.7、154.4。 室内生测结果表明，毛鱼藤酮对菜粉蝶、甘蓝蚜、小菜蛾、柑桔全爪螨都具有生物活性。毛鱼藤酮对柑桔全爪螨具有触杀作用，其LC_(50)为0.133#mu#g/mL，而鱼藤酮为0.153#mu#g/mL；毛鱼藤酮对甘蓝蚜的触杀活性较低，其对甘蓝蚜的LC_(50)为52.73#mu#g/mL，而鱼藤酮LC_(50)为7.14#mu#g/mL；毛鱼藤酮对菜粉蝶的点滴触杀活性较鱼藤酮的差，其LD_(50)为11.74#mu#g/头，而鱼藤酮的为1.46#mu#g/头；毛鱼藤酮对菜粉蝶幼虫的拒食活性要比鱼藤酮低，处理24h和48h后，毛鱼藤酮对菜粉蝶的AFC_(50)分别为28.28#mu#g/mL和21.82#mu#g/mL，而鱼藤酮为16.72#mu#g/mL和15.40#mu#g/mL。当以不同的试验方法测定毛鱼藤酮和鱼藤酮对小菜蛾的毒力时，其活性有较大差异，从浸叶法测定结果来看，毛鱼藤酮对小菜蛾的LC_(50) 为21.52#mu#g/mL，比鱼藤酮的69.29#mu#g/mL要低；从potter喷雾法测定的结果来看，毛鱼藤酮对小菜蛾的LC_(50) 为29.46#mu#g/mL，比鱼藤酮的22.80#mu#g/mL高。毛鱼藤酮对菜粉蝶幼虫的体重、取食量和蛹重都有较大的响，但没有鱼藤酮的效果明显。另外，毛鱼藤酮对黄曲条跳甲具有毒杀作用。 毒理试验表明，毛鱼藤酮能抑制牛心线粒体中NADH氧化酶的活性，但其IC_(50) 为924.31μmol/mL，比鱼藤酮的836.33μmol/mL要高，这说明毛鱼藤酮对牛心线粒体中NADH氧化酶的抑制活性比鱼藤酮低。 盆栽试验表明，毛鱼藤酮对三龄菜粉蝶幼虫具有较好的防治效果，以200#mu#g/mL和100#mu#g/mL两个浓度处理三天后均达到100％的防效。当以200#mu#g/mL处理时，毛鱼藤酮防效与鱼藤酮的相近，但当以_(50)#mu#g/mL处理时，毛鱼藤酮对菜粉蝶幼虫的防效比鱼藤酮的要低。 关键词：毛鱼藤酮，鱼藤酮类化合物，HPLC，NMR，生物活性