华南地区根结线虫鉴定及DNA多态性分析

华南地区根结线虫鉴定及DNA多态性分析 摘 要 根结线虫(Meloidogyne spp.)是一类在农作物上为害极大的植物病原线虫。由于根结线虫在分类鉴定描述中所用的性状特征很多，各种群之间变异较大，因而鉴别结果不够可靠，这给分类鉴定和防治带来了很大的困难。本研究对采自广东、广西、福建、海南、云南和湖南共6个省的87个根结线虫种群，从形态学、鉴别寄主、生物化学和分子生物学等方面进行研究，以期得到比较准确、科学的研究结果。主要结果如下： 1． 利用比较形态学，鉴定出根结线虫种类共5个，分别为南方根结线虫(M.incognita) 、花生根结线虫(M.arenaria)、爪哇根结线虫(M.javanica) 、番禺根结线虫（M.panyuensis）和湛江根结线虫（M.zhanjiangensis）。在所有供试种群中，2个种群为花生根结线虫，3个种群为爪哇根结线虫，3个种群为混合侵染种群，其中1个为花生根结线虫和南方根结线虫的混合侵染种群，1个为花生根结线虫和番禺根结线虫的混合侵染种群，还有1个为湛江根结线虫和南方根结线虫的混合侵染种群，其余均为南方根结线虫，表明在我国南方地区根结线虫种群以南方根结线虫为主。 2． 对29个南方根结线虫种群进行鉴别寄主研究表明，1号小种有25个，2号和3号小种各2个，未见4号小种，这说明我国南方地区根结线虫的优势种群为南方根结线虫1号小种。 3． 首次应用超薄等电聚焦电泳技术对30个根结线虫种群酯酶同功酶进行成功分析。该技术能区分南方根结线虫、花生根结线虫和爪哇根结线虫。该方法快速、准确、分辨率高，其电泳带型较细，拖带现象不明显，分析、检测量大，是根结线虫同功酶分析的一个比较理想的方法。 4． 对48个随机引物进行了筛选，得出多态性较好的引物12个。应用筛选出的12个引物，对不同地区共30个根结线虫种群进行RAPD分析，共得到179条DNA多态带，并且所有种群扩增条带均不相同，供试种群间存在着丰富的多态性。分析结果同时表现出种间差异大于种内差异的共同趋势，这表明上述12个引物能够较客观地反映种群间亲缘关系的远近。南方根结线虫、爪哇根结线虫、花生根结线虫和北方根结线虫的分子系统发育关系为：北方根结线虫）花生根结线虫）爪哇根结线虫）南方根结线虫（4号小种，2号小种，3号小种，1号小种）。基于种群间的相似系数分析和应用UPGMA法构建的聚类树状图，显示出不同的根结线虫在较低的相似性系数范围聚类，而绝大多数种内的不同种群均以较高的相似性系数聚在一起，这与形态分类特征基本一致，反映了形态学分类的分子遗传本质，同时也表明了应用RAPD技术进行根结线虫亲缘关系分析和种类鉴定具有合理性和可行性。 关键词： 根结线虫 多态性 同功酶 超薄等电聚焦电泳