一类新的白介素受体IL17RE的克隆鉴定与抗体制备

一类新的白介素受体IL17RE的克隆鉴定与抗体制备 摘 要 白细胞介素17（interleukin 17,IL-17）是由激活的T细胞分泌的一种促炎症细胞因子。随着近年来人类基因组序列及蛋白质学的发展，新近发现的一系列相关分子组成了一个新的细胞因子家族——IL-17 家族，IL-17家族在细胞信号传导，参与炎症及肿瘤的发生发展等方面发挥了十分重要的作用。该家族的第一个成员被命名为IL-17A，其它几个新成员分别被命名为IL-17B,C,D,E,F。这众多的细胞因子具有什么样的生理功能，其作用机制是什么，它们的特异性受体是什么，激活什么样的信号通路。所有这些问题成了全世界细胞信号传导领域的热门研究课题。与该家族相关的天然受体也相继被发现，分别为IL-17R,IL-17RH1,IL-17RL(RECEPTOR LIKE),IL-17RD,IL-17RE,但这些受体的特异性配体还未完全被揭示出来。 白介素受体IL17RE基因是白介素17受体家族一类新发现的基因，它的特异性配体是什么，下游信号通路及生理功能都还不清楚。本研究首先用生物信息学方法对人IL17RE基因进行了初步研究：通过在NCBI网站Blast Nr数据库，发现该基因与人IL17RC基因在蛋白水平上有15％的同源性，该基因有5种剪切方式，小鼠同源基因有4种剪切方式；通过Blast EST和基因组数据库以及比对人与小鼠该基因的基因组区段，预测出大鼠的同源基因，对该基因的基因组结构进行了分析，并预测出一些可能的新外显子。在生物信息学初步研究基础上，通过RT-PCR的方法从人肝癌细胞系HepG2及大鼠肝脏中克隆出人IL17RE基因胞外区及大鼠IL17RE基因胞内区。然后用pGEX4T原核蛋白表达系统对这两个区段进行了蛋白诱导表达，以此两种蛋白为抗原制备了兔源的多克隆抗体，用WESTERN印迹对抗体进行了检测。