本文是一篇口腔医学论文，本实验通过注射自体 PRP 治疗 TMJOA 得出以下结论：自体 PRP 通过关节腔注射治疗 TMJOA，能够在早期抑制炎症反应，降低关节滑液中 IL-1、IL-6 和 TNF-α的浓度，且效果优于 HA，但对于早期的软骨破坏无明显的修复作用。
1 材料
1.1 实验动物及分组
实验动物由济南金丰动物实验有限公司提供的雄性新西兰大白兔共 36 只，体重3.5～3.9kg，平均体重 3.7kg（许可证号：SCXK(鲁) 2018 0006）。于遵义医科大学动物实验中心分笼饲养，实验前适应性饲养一周，观察无全身疾病表现、无咬合错乱、反应以及动作敏捷、营养状况良好者纳入实验，按单纯随机抽样原则抓取实验动物并随机分成 4 组：空白组，模型对照组，玻璃酸钠组，PRP 组。每组 9 只实验动物，选择右侧颞下颌关节作为实验侧。
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1.2 主要实验试剂
(1)胶原酶 II（图 1-1） Solarbio(2)兔白细胞介素-1（IL-1）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒； TaK aRa(3)兔白细胞介素-6（IL-6）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒； TaK aRa(4)兔肿瘤坏死因子-α（TNF-α）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒 Biowest(5)乙二胺四乙酸二钠(EDTA) servicebio(6)苏木精试剂 servicebio(7)伊红试剂 servicebio(8)3%戊巴比妥钠溶液 遵义医科大学外科教研室(9)10%中性缓冲福尔马林固定液 广州维格斯(10)玻璃酸钠注射液（图 1-2） 上海伍备
图 1-1 II 型胶原酶（10mg /支）图 1-2 注射用玻璃酸钠
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2 方法
2.1 骨关节炎模型的建立
2.1.1 麻醉
麻醉药物选择 3%戊巴比妥钠（剂量为 1ml/kg），自兔耳缘静脉注射对动物进行麻醉，麻醉过程中注意防止动物窒息，时刻观察动物的呼吸是否出现异常，如呼吸急剧加深变缓慢或消失，角膜反射是否消失。麻醉生效后在右耳前区与眶外侧之间备皮（图 1-2），0.5%碘伏消毒术区，铺一次性无菌巾布。
图 2-1 麻醉 图 2-2 局部备皮
2.1.2 兔 TMJOA 的关节模型的建立
采用王栋等[21]的改良穿刺法进行关节腔穿刺:在全身麻醉肌肉松弛的情况下,被动使兔下颌连续反复上下运动，模拟开闭口运动，此时用手指在颞下颌关节区触诊，观察髁突的运动以及关节间隙，助手在最大的张口位时固定下颌骨，实验者指尖抵在关节间隙上确定，另一只手拿 1ml 注射器在眶外侧中点后 5mm 进针，向前、内、下进针 3 mm，进入关节间隙抵及颞下颌关节髁突,此时运动下颌可以发现针头随着髁突上下运动(此时为关节上腔)，再次从骨膜表面向前滑行少许，回抽无血后注射(此时为关节下腔)。空白组的右侧关节下腔注射 0.2ml 生理盐水（图 2-1），PRP 组、玻璃酸钠组与模型对照组的同侧关节注射 2%的 II 型胶原酶的 0.2ml 诱发建立兔颞下颌骨关节炎动物模型（图 2-2），造模后的结果评估采取大体标本以及 HE 染色切片进行观察，如出现关节软骨的破坏、缺损等典型的 OA 病变可视为模成功。
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2.2 组织学观察（HE 染色）
2.2.1 关节标本的蜡片制作
1.关节固定：使用咬骨钳制取单侧髁突，使用生理盐水冲洗干净碎骨片后放入中性的福尔马林液（10%）固定，固定时间为 48 小时。
2.脱钙：脱钙完成后的关节髁突标本置于自来水下反复清洗 15min，置于 EDTA（10％）溶液（PH=7.2）中进行软骨脱钙，固液体比例为 1：20，每 3 天更换一次，并观察标脱钙情况，即肌注针头可轻松穿过视为脱钙完成。达到脱钙要求的髁突标本在 PBS 液中清洗 l0min 后放入脱水盒内。
3.脱水透明浸蜡：乙醇脱水顺序为 30%→50%→70%→95%→无水乙醇。二甲苯中透明顺序为 50%二甲苯→二甲苯 1→二甲苯 2→二甲苯 3。浸蜡的顺序为软蜡 1h-软蜡-2h-硬蜡 2h。
4.标本包埋切片：使用包埋机进行标本的包埋，蜡块成型凝固后取出，四度冰箱放置过夜后再进行切片，石蜡切片机切取 5μm 的切片，转移到 40℃的展片台内的清水上，选择完整无划痕的载玻片捞片，放入 60℃烘箱内过夜，取出后常温保存备用。
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3 结果............................10
3.1 模型建立的评价............................10
3.2 PRP 的血小板计数结果............................10
3.3 髁突大体标本肉眼观察............................10
4 讨论............................20
4.1 关节腔内注射建立颞下颌关节骨关节炎的模型建立............................20
4.2 选择 PRP 的依据与 PRP 的制备............................20
4.3 髁突软骨的大体标本与病理组织观察评价............................20
5 结论............................30
4 讨论
4.1 关节腔内注射建立颞下颌关节骨关节炎的模型建立
颞下颌关节是唯一需要双侧关节协同发挥作用的关节，因为咀嚼运动的复杂性与特殊性，其结构组成与其他大关节有着明显的不同，而人体 TMJ 标本研究取材难以实现，技术以及伦理道德上都存在限制[23 ,24]。因此采用动物进行 TMJOA 的模型建是研究其发病机制、预防及治疗的替代方法。兔的 TMJ 是也是由稳定的盘颞关节和一个盘髁关节相辅相成，结构功能和运动轨迹均接近于人类，可成为 TMJOA实验研究的替代模型[25,26 ]。本实验选用雄性新西兰大白兔作为建立 TMJOA 的实验动物。
局部炎症、软骨下骨异常改建、软骨细胞凋亡等都被被认为是 TMJOA 的原因之一，所以针对不同的发病机制来建立动物模型方法也较多[27,28,29 ]。而动物造模的效果是否理想在于 OA 的模型能否在较合适的时间完成，与人的病变关节的改变要接近或一致，并且操作是否可重复等[30]。大体上可分为非手术和手术方法，而其中非手术方法有：关节腔内注射胶原酶，透明质酸酶等诱导动物骨关节炎的发生[31]。本实验采用Ⅱ型射胶原酶进行关节腔注射进行造模，利用外源性的基质金属蛋白酶(matrix metalloProteinases，MMPs)破坏局部微环境的平衡并造成了局部的滑膜炎症，继而发生软骨破坏、局部炎症等 OA 的表现。经组织病理学观察发现，OA 造模组均出现不同程度的髁突软骨病损。术后可以观察到软骨裂隙出现，软骨基质缺损及骨赘形成等变化，与目前在人体 TMJOA 的病理性改变接近[32 ]。另外，本次研究中的实验组造模后炎性因子 IL-1、IL-6 和 TNF-α的含量远远高于空白对照组，且差异有统计学意义，证明本次实验的造模方法可造成关节滑膜炎症反应，更好的模拟了炎症对于 TMJOA 的影响。
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5 结论
本实验通过注射自体 PRP 治疗 TMJOA 得出以下结论：自体 PRP 通过关节腔注射治疗 TMJOA，能够在早期抑制炎症反应，降低关节滑液中 IL-1、IL-6 和 TNF-α的浓度，且效果优于 HA，但对于早期的软骨破坏无明显的修复作用。
参考文献（略）
