研究口腔念珠菌病患者唾液溶菌酶含量
摘 要 目的:了解唾液溶菌酶水平与口腔念珠菌感染的关系。帮写医学论文方法:以正常人群作对照,用琼脂糖含菌平板法测量口腔念珠菌病患者混合唾液溶菌酶含量。结果:口腔念珠菌感染者唾液溶菌酶含量高于非感染者对照组。
关键词：口腔念珠菌病 溶菌酶 唾液
溶菌酶(Lysozyme,Lyz)作为机体非特异免疫因子之一,参与口腔组织的稳态平衡调节过程,与龋齿、牙周病及口腔粘膜病的发生发展有一定关系,同时它具有广谱抗微生物作用[1-3]。目前关于Lyz抗念珠菌的体外实验已基本证实[4]。但临床研究更加复杂,Lyz的含量受各方面因素影响,相对报道较少[5,6],国内尚未见报道。本研究通过测量无全身疾患的口腔念珠菌病患者的唾液Lyz,初步研究唾液Lyz与口腔念珠菌感染的关系。
材料和方法
1 研究对象:
1·1 正常对照组:本院学生、进修生和本院门诊患者的陪同人员等健康志愿者,并符合下列条件:①无唾液腺疾病、口腔粘膜病及系统性疾病。②唾液念珠菌培养阴性。③近一月未用过抗生素、抗真菌药物及免疫抑制剂等。共27例,男性5例,女性22例。年龄17-70岁,平均年龄46岁。
1·2 口腔念珠菌病患者:本院粘膜科门诊患者。病例选择条件:①根据临床症状和体征选择典型病例。②唾液念珠菌培养阳性,一般>100个菌落/ml。③无全身疾病,近一月未用过抗生素、抗真菌药物及免疫抑制剂等。共收集22例口腔念珠菌患者,男6例,女16例。年龄13-79岁,平均年龄为55·5岁。
2试剂和材料:Sabouraud培养基(天津金章医用新技术研究所生产);CHROMagar念珠菌显色培养基(法国CHROMagar公司);打孔含菌琼脂糖平板(北京渡时技术有限公司);电热恒温培育箱78-1型(湖北黄石医疗器械厂);离心机(德国Heraeus in-struments)。
2 测定方法:
3·1 收集唾液标本:取非刺激性混合唾液约1ml,室温下离心(2000转/每分钟),10分钟。
3·2 测定溶菌酶含量:取上清液5μl,注入琼脂糖板孔内,放于25-27℃水平湿盒内10小时,测量溶菌环的直径,查表确定溶菌酶含量。
3实验方法:采用盲法(临床检查与试验工作人员分开);多人重复测量减少误差;不同时间测定同一受试对象唾液溶菌酶的浓度。
结 果
1 标本收集时间对Lyz浓度的影响:为测试一天不同时间收集的唾液标本Lyz浓度有无差异。实验中,从正常人群和口腔念珠菌病患者中各随机选择一例。分时间段多次测量,初步排除标本收集时间不同影响Lyz浓度。
2 口腔念珠菌病患者及对照组唾液溶菌酶浓度:口腔念珠菌病患者唾液溶菌酶浓度高于对照组,进行t检验和方差分析,正常组与感染组溶菌酶平均值差异有统计学意义。
讨论
1口腔念珠菌感染和唾液溶菌酶含量的关系:溶菌酶(Lysozyme,Lyz)是一种水解酶,广泛存在于各种组织、体液和分泌液中,具有广谱抗微生物作用,为正常机体非特异性免疫防御机制的组成部分之一。口腔Lyz由唾液腺分泌,在混合唾液中,Lyz浓度为1~57μg/ml。在本次实验中,用平板打孔法测得混合唾液Lyz含量在20~82μg/ml。与文献报道略有不同[7]。我们对无全身系统疾患的口腔念珠菌病患者唾液Lyz含量测定结果表明其水平高于正常对照组,并有统计学意义。多数学者认为念珠菌易感人群,如免疫缺陷病人、老年人,唾液Lyz含量升高[4,5],血清IgA缺陷病人,混合唾液Lyz含量较高。由此可以看出,本实验排除了全身因素对结果的影响,能较好显示混合唾液Lyz含量与口腔念珠菌感染的关系。口腔念珠菌病患者唾液Lyz浓度升高,其临床机制和临床应用目前并不明了。根据本研究,我们推测可能与口腔感染念珠菌后吞噬细胞分泌免疫因子增加有关。具体调控机制需要进一步研究。
2 影响唾液Lyz含量的因素:在复杂的口腔生态环境中唾液Lyz活性和含量受多种因素的激活和抑制。性别、年龄、唾液流量及pH值、无机离子成份和全身状况,都可能成为其影响因素[8]。有关性别对唾液溶菌酶的影响存在不同意见[9]。1997年Yeh认为刺激性腮腺唾液Lyz不存在性别差异;而刺激性颌下腺、舌下腺唾液中男性高于女性[9]。我们在本研究中还检测了70例标本的静止混合唾液的Lyz含量女性高于男性,但性别差异没有统计学意义。这种结果不同可能与选择研究人群不同,所测唾液的腺体来源不同有关。由于本研究样本数较少,有待扩大样本量,增加研究因素进一步研究。小结:唾液Lyz体外实验已多次证实有抗念珠菌活性,其含量受多种因素调节和影响,评价两者关系有一定难度。本初步研究,严格控制入选人群,尽可能除外全身疾患和服药史等对Lyz的影响,并以正常人群作对照。研究表明,口腔念珠菌感染后,唾液溶菌酶含量上升。
参 考 文 献
1帮写医学论文杨保全,许 卫,肖学和.溶菌酶在口腔疾病中的作用.现代口腔医学杂志.1990;4(1):40
2 Bladen H,Hageage G,Harr R et al.Lysis of certain organ-isms by the synergistic action of complement and lysozyme.JDent Res.1973;52(2):371
3 Raeste AM,Tuompo H.Lysozyme activity and flow rate ofmixed saliva in children, adolescents and adults. Scand JDent Res.1976;84(6):418
4 Wu T,Samaranayake LP,Leung WK et al. Inhibition ofgrowth and secreted aspartyl proteinase production inCan-dida albicansby lysozyme.J Med Microbiol.1999;48(8):721
5 Tsang C,Samaranayake LP.Salivary lysozyme and relatedparameters of a predominantlyChinese,HIV-infectedcohortinHongKong.OralDis.1999;5(3):241
6 Muller F,Holberg-Petersen M,Rollag H et al.Nonspecificoral immunity in individuals with HIV infection.J AcquirImmune Defic Syndr.1992;5(1):46
7 Stuchell RN,Mandel ID.A comparative study of salivarylysozyme in caries resistant and caries-susceptible adults.JDent Res.1983;62(5):552
8 于保华,金慰鄂.唾液溶菌酶活性在经期变化的初步观察.中华口腔医学杂志.1987;22(6):323
9 Yeh CK,Dodds MW,Zuo P et al.A population-based studyof salivary lysozyme concentration and candidal counts.ArchOral Biol.1997;42(1):25
