胃幽门螺杆菌根除率受到的影响

胃幽门螺杆菌根除率受到的影响

【摘要】　目的　明确口腔幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, Hp)对胃幽门螺杆菌根除率的影响。方法　帮写口腔医学论文选择102例有上腹部症状、并经全口牙周检查有不同程度牙周炎的患者进行胃镜检查,每例均取口腔标本进行Hp检测。用二氧化硅微粒法提取所有样本中的DNA,引物选用尿素酶C基因和CagA基因进行PCR扩增。结果　胃Hp阳性组的口腔Hp检出率(n=58,43.1%)高于胃Hp阴性组(n=44,22.7%),两者比较差异有显著性(P<0.05)。58例胃Hp阳性患者经药物治疗后4周进行胃Hp的复查,其中口腔Hp阳性者的胃Hp根除率(64·0%,16/25)低于口腔Hp阴性者(72.7%,24/33);治疗后1年,口腔Hp阳性者的胃Hp根除率(36.0%)与Hp阴性者的根除率(63.6%)相比差异有显著性(P<0.05)。结论　胃Hp的根除率受口腔Hp存在的影响;口腔Hp阳性者的胃Hp根除率显著低于口腔Hp阴性者根除率。

【关键词】　幽门螺杆菌 牙周炎 牙菌斑

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)是一类微需氧、革兰阴性、可移动的螺旋杆菌,是慢性胃炎和十二指肠溃疡的主要致病因素,与胃溃疡密切相关[1,2],还与胃癌的发生有关[3]。有资料表明,Hp的感染存在明显的地区差异,并与经济条件和生活习惯有关。发展中国家人群中Hp的带菌率高于发达国家[4],一般在50%~70%左右,慢性胃炎和胃溃疡患者的感染率高达80%~100%[5]。Hp在发达国家健康人群中携带率一般低于30%。我国属发展中国家,Hp感染率高达61%,属高感染地区[6]。最近的研究已证实胃病患者的口腔中存在Hp,尤以龈下区多见[7]。但是口腔Hp对胃Hp根除率有何影响并不清楚,为明确口腔Hp对胃Hp根除率的影响,我们做了以下研究。

资料和方法

1.病例选择:从北京大学第一医院消化科选择102例有上腹部症状、并经全口牙周检查有不同程度牙周炎的患者进行胃镜检查。尿素酶测试阳性者和Worthin-Starry银染色或细菌培养至少1项阳性的患者被判断为胃Hp感染。这些患者经胃镜检查和病理观察,分别诊断为慢性胃炎、胃溃疡、十二指肠溃疡,其中胃Hp感染者为58例,男33例,女25例,年龄22~65岁(平均40.8岁)。尿素酶测试和Worthin-Starry银染色或细菌培养均阴性者44例。所有患者全口牙均不少于20个, 3个月内未服用抗生素及胃药,12个月内未接受过牙周治疗,妇女未妊娠,无其他系统性疾病。

2.龈下菌斑取样:所有患者的龈下菌斑和唾液标本均在胃镜检查和活检前采集。棉卷隔湿后用消毒刮治器取4个第一磨牙颊侧近中位点(第一磨牙缺失者取第二磨牙)的龈下菌斑,菌斑均放置于含30μl生理盐水的同一试管内,液氮速冻保存。

3.含漱液取样:用5 ml 0.9%生理盐水含漱15 s,收集后放于试管中,液氮速冻保存。

4.药物治疗:胃镜检查后对Hp阳性患者进行药物PPI三联治疗(兰索拉唑30 mg 2次/d,甲硝唑0.4 g 2次/d,阿莫西林1.0 g 2次/d)2周。

5.13C呼气试验:对胃Hp感染患者治疗后4周及1年后分别复查胃Hp感染状况,Hp检测采用13C呼气试验。13C呼气试验阴性者为Hp根除,阳性者为Hp未被根除。根据口腔标本Hp的检测结果将胃Hp感染患者(58例)分为口腔Hp阳性组(25例)和阴性组(33例),进行胃Hp根除率的比较。

6.含漱液及牙菌斑中DNA的提取:将冻存标本自液氮中取出后立即放在冰上,加标本体积3倍的结合液A及10μl玻璃奶,置于55℃恒温器上5 min并每分钟摇动1次,以促进DNA和玻璃奶的结合。然后用离心机10 000 r/min离心20 s,弃上清液,再加入洗涤液0.5 ml,用振荡器使玻璃奶重悬。重复洗涤3次,短暂离心后吸尽洗涤液,放在55℃恒温器上至完全干燥。再加入TE缓冲液30μl,混匀后在55℃恒温器上放置2 min,12 000 r/min离心3 min,小心吸出上清液,4℃保存。

7.引物的选择:参考Bickley等[8]及Lage等[9]的研究,根据尿素酶C基因和CagA基因设计引物。尿素酶C基因:引物1(UC1):5′-AAGCTTTTAGGGG-TGTTAGGGGTTT-3′,引物2(UC2):5′-AAGCTTACT-TTCTAACACTAACGC-3′,预期扩增片段为294 bp。CagA基因:引物1:5′-AATACACCAACGCCTCCAAG-3′,引物2: 5′-TTGTTGCCGCTTTTGCTCTC-3′,预期扩增片段为400 bp。

8.聚丙烯酰胺凝胶电泳:取PCR扩增产物5μl加样本缓冲液1μl,上样于8%聚丙烯酰胺凝胶进行电泳。

9.统计学方法:采用SPSS 10.0统计软件包。率的比较选用χ2检验。结果1.PCR敏感性测定:用紫外分光光度计对Hp临床株DNA进行定量,以尿素酶C基因为引物进行PCR扩增的灵敏度测试,Hp临床株DNA样本以10倍递增稀释检测。PCR扩增后可检测到100 fg的Hp DNA,相当于100个细菌。2.胃黏膜活检结果:58例尿素酶试验阳性患者中银染色阳性者56例(96.5%),细菌培养阳性者49例(84.5%)。这些患者除尿素酶试验阳性外,其他银染或细菌培养至少有1项阳性,其中3项全部阳性者为47例(81.0%)。3.胃病患者口腔Hp的检测:在58例胃Hp感染患者中菌斑或含漱液至少1项阳性者共25例,占胃Hp阳性患者的43.1%(25/58),其中2例菌斑和含漱液均有Hp感染(表1)。在44例胃Hp阴性患者中菌斑或含漱液至少1项阳性者共10例(其中5例菌斑和含漱液均阳性),占胃Hp感染阴性者的22.7%(10/44),显著低于胃Hp阳性患者的口腔Hp感染率( 43.1%),P<0.05,详见表1。表1　胃病患者口腔Hp的检测结果(例)组别例数龈下菌斑U(+) C(+) U+C(+)含漱液U(+) C(+) U+C(+)胃Hp阳性58 7 2 0 16 0 2胃Hp阴性44 5 0 0 10 0 0　　注: U:尿素酶C基因;C: cagA基因　　4.口腔Hp的存在对胃Hp根除率的影响:治疗前已有胃Hp感染的58例患者经药物三联疗法治疗4周后进一步接受胃和口腔Hp的检测,胃Hp阳性同时伴口腔Hp感染的25例患者中有9例胃再次检出Hp,其胃Hp根除率为64·0%(16/25),低于口腔Hp阴性患者(72.7%,24/33),但统计学检验差异无显著性(P>0.05)。1年后口腔Hp阳性患者的胃Hp根除率下降为36.0%(9/25),显著低于口腔Hp阴性患者的根除率63.6%(21/33),P<0.05。讨论自从1983年Warren和Marshall[10]从胃炎患者的胃黏膜中首次分离出Hp,国内外学者对Hp与胃肠道疾病的关系进行了大量深入的研究。目前认为,Hp是慢性胃炎、十二指肠溃疡的重要病因,与胃溃疡密切相关。一些研究表明Hp在体外对抗生素敏感,但根除人体内的Hp却十分困难。目前所报告的PPI三联疗法的Hp根除率为71. 4% ~84%[11]。影响Hp感染治疗效果的因素可能有:①胃内酸性环境影响抗生素治疗效果[12];②Hp对抗菌药物产生耐药是导致Hp感染治疗失败的又一原因[13,14];③Hp可能定植于牙菌斑、舌背黏膜等处躲避药物作用[7],使治疗后胃黏膜重现Hp而导致治疗失败。本研究在胃病患者用药前后分别检测了口腔中的Hp,结果发现口腔Hp阳性患者用药4周后的胃Hp根除率低于用药前口腔Hp阴性患者,但差异无显著性(P>0.05),用药1年后的胃Hp根除率则显著低于口腔Hp阴性组(P<0.05),说明口腔Hp的存在影响胃病患者胃Hp的根除。而药物治疗之所以不能根除口腔中Hp的原因可能是由于口腔中的菌斑微生物具有独特的“生物膜”结构,微生物借此暂时逃避药物的杀灭,在适当时候再次从生物膜中释放,发挥其致病作用[15]。

具有牙周炎的胃病患者经过药物三联治疗和牙周基础治疗1年后的胃Hp根除率显著高于未做牙周基础治疗的同类患者(P<0.05)[16],因此推测药物加牙周基础治疗有助于Hp根除,其原因可能一方面是药物的抗菌作用,另一方面通过牙周治疗机械去除龈上和龈下菌斑,有效地破坏了龈下生物膜结构,从而有效去除了体内和口腔内的Hp,减少Hp的再感染机会。另外牙周袋内具有独特的微生态环境:低氧化还原电势和细菌发酵糖类在菌斑中产酸这样一个独特的厌氧酸性环境,可能有利于Hp的生长[17]。本研究不仅观察了口腔Hp对胃Hp根除率的影响,同时也比较了胃Hp阳性与阴性患者口腔Hp的检出率,结果发现胃Hp阳性患者较胃Hp阴性患者的口腔Hp检出率高,说明口腔Hp的存在也与胃Hp密切相关。然而,本研究胃病患者的口腔Hp检出率(43.1%)却低于本研究室的另一项研究[7](90.6%),虽然这两项研究采用了同样的引物,患者均是有胃病症状的胃Hp感染者,但本研究因时间和条件所限,只取4个位点的龈下菌斑作为1份菌斑合并样本,以及1份含漱液标本,人均仅2个样本,有可能患者口腔中的Hp分布不均匀,口腔其他部位存在的Hp未被检出,或者是样本中的Hp数目低于检测方法的敏感性(100个细菌),以至检出率较低。本研究所采用的13C呼气实验因其无创伤、结果准确,临床上在常规胃镜检查确诊服药后常用其来检测胃内Hp感染状况。

参考文献

1 Taylor DN, Blaser MJ. The epidemiology of He