1.5 操作方法与步骤本次实验的拉伸应变量分别为0%,8%,12%,16%,20%五种,加力时间为24 h,48 h,72 h三种,总共为15种处理方法,每种处理方法设3个样本,总共需15个样本。将准备好的15个样本随机放在加力装置上,整套装置放在5%CO2、95%空气,37℃饱和湿度的恒温孵箱中,静置加力。加力24 h后小心把培养皿从加力装置上取下,用移液枪取1 ml培养基移至冻存管中,放在-70℃冰箱中待测,用于检测各个力值组加力24 h后PGE2的含量;弃去剩余的培养基,用PBS液冲洗弹性培养皿一次,再加入2 ml培养基,在相同条件下继续加力至48h,再同上方法取出培养基放于-70℃冰箱中,用于检测加力48 h后各个力值组PGE2的含量;用PBS液冲洗培养皿一次后加入2 ml培养基,在相同条件下继续加力至72 h,再取出培养基放于-70℃冰箱中,用于检测加力72 h后各个力值组PGE2的含量。
1.6 数据测量本实验培养基中PGE2的含量用RIA ELISA法测得。从已平衡至室温的密封袋中取出抗体包被板条,在非特异性结合孔(NSB)和最大结合孔(B)中加50μl含50 g/L小牛血清的DMEM培养基,再加50μlEIA缓冲液到NSB孔中。设5种标准浓度,比例为1∶2∶4∶8∶16,每个标准浓度设2个并行孔。除了完全活性孔(TA)和B孔,每孔加50μl样本培养基。除了完全活性孔(TA)和B孔,每孔加50μL PGE2乙酰胆硷脂酶示踪剂。除B和NSB孔外,每孔加50μl PGE2单抗,用封板胶纸封反应孔,放于4℃的孵箱中孵育18 h。将反应板用清洁缓冲液在自动洗板仪上洗板5次,吸干。每孔加入ELLMAN液200μl,在TA孔中再加入5μl示踪剂。将反应板放在4℃的摇床90 min。将反应板放置于全自动微板读板仪上测量A450(5 min)。将所得的A值数据输入医用实验数据处理智能系统,描绘出标准曲线,计算出各样本的PGE2的含量。
1.7 数据的统计学处理所得各数据均用-x±s来表示。各处理组与对照组的比较采用Dunnettt检验,在SPSS软件上完成。
2 结 果
2.1 免疫组织化学的结果显示牙周膜成纤维细胞的波丝蛋白染色阳性,细胞胞浆棕黄色着色(图1),证实•559•实用口腔医学杂志(J Pract Stomatol)2003 Nov,19(6)作者单位:浙江大学附属口腔医院修复科 310006 (胡军) 大连市口腔医院 (郑向明)
3 讨 论
3.1 前列腺素(PG)是以花生四烯酸为底物,在环氧化酶、磷脂酶以及还原酶等系列酶的作用下合成的非饱和脂肪酸。它分布广,局部合成、释放和灭活,广泛介入细胞生理活动过程。前列腺素E(prostaglandinE, PGE)分为9型,共14种,PGE是其中最常见的一型,分为PGE1和PGE2两种[5]。在牙周组织
