第一章 绪论
1.1.1 灵芝简介
灵芝的药理活性成分很多，应用范围也很广泛。可用于循环、神经、消化、内分泌、呼吸及运动等各个系统疾病的治疗[2]。现代医学证明，灵芝在临床上主要用于治疗冠心病、高血压、高血脂、慢性支气管炎、肝炎、白细胞减少症、消化不良、神经哀弱等疾病。临床实验证明，灵芝具有抗肿瘤、抗过敏、抗哀老、免疫调节、降血压和降血糖等作用。灵芝不但具有医疗效果，而且具有美容和保健功能。
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研究者们对灵芝栽培技术的研究，主要集中在栽培料配方、栽培方式、栽培条件、病虫害防治等方面。研究的灵芝栽培方式主要有瓶栽、袋料栽培、椴木栽培、仿野生栽培等。椴木栽培所得的灵芝子实体品质好，但生物转化率低，会危及林业安全。而袋料栽培则是利用各种农、林、牧、工产品的废弃物或副产物等原料，按照一定比例混合成的培养基来代替段木栽培食用菌的一种生产方式[3、4]。吕明亮等[5]研究认为，用不同树种作为灵芝的栽培基质得到的灵芝子实体不仅个头大小有差异，而且色泽深浅及光亮度有明显差异，其生物转化率也差别很大；该研究的结果表明，适合作为灵芝栽培基质的树种低依为枫香、青冈、漆树、杨梅、拟赤杨、白栋、甜储。而刘荣松等[6]的试验结果表明，用不同阔叶树种作为基质进行灵芝的锻木栽培，得到的灵芝子实体和孢子粉产量均以白栋树种为最高，青冈树种次之，而杨梅树种的最低，认为这可能是由于杨梅树本身含有单宁这种物质而抑制灵芝生长，因此得出结论白栋、青冈和漆树较为适合栽培灵芝，而杨梅不适宜。近年来，研究者己经筛选出了许多适合栽培灵芝的原料，常规的有如棉籽壳，玉米芯，木屑等；具有地方特色的栽培料有茶叶渣，甘蔗渣，甜菜渣等。崔大练等[7]经试验证明豆秸是一种良好的灵芝栽培基质。因此认为用豆秸代替木屑作为灵芝栽培基质有很大推广价值。闫茂华等[8]研究认为，废弃茶叶、栎叶的营养丰富可作为灵芝的栽培基质，栽培出的灵芝个大、外观好、色泽亮。此外，也有研究认为，茶枝屑与杂木屑栽培灵芝相比，生物转化率低、周期长，产量低但灵芝多糖含量较高[9]。利用芦笋秆、蔗渣以及葵花籽壳等栽培灵芝也偶见报道[10-13]。叶丽秀等[14]研究了灵芝栽培基质的材质与灵芝品质的关系，实验结果表明，栽培料的结构越坚硬，灵芝产量高、芝盖大而厚实，但灵芝生长周期长；而原料的结构越松散，灵芝产量低、芝盖小而薄，但是灵芝生长周期短。
邹丹蓉等[15]从节省木材，保护森林资源，增加种桑养蚕附加值出发，成功地采用桑枝来栽培密纹灵芝。李娜等[16]认为，桑枝原本就是一种中药材，用桑枝栽培出的灵芝含有灵芝多糖比锻木灵芝高。因此，利用桑枝作为灵芝栽培基质应在我国蚕桑发达地区进行推广。近年来还有一些研究者利用中药渣、中药边角料作为栽培基质进行灵芝药效学研究[17]。赵秀芳[18]利用中药渣和醋渣作为灵芝的栽培料，结果醋渣配以等量的中药渣栽培灵芝其生物转化率可达到甚至稍超过纯棉籽壳对照组，并且菌丝洁白、浓密、粗壮。根据文献报道可知，将桑枝、药渣作为灵芝的栽培基质栽培出灵芝子实体是可行的。
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第二章 桑树、药渣灵芝栽培技术的研究
当今社会，随着经济不断发展，环境污染问题也越来越严重，农业废弃物就是一个大大的污染源，如何处理好这些农业废弃物已经成为我们社会今后发展的一大难道，为此，我们发现广东省郊区有许多桑枝被蚕农们浪费，再加上凉茶厂的药渣也被浪费，造成资源的浪费；因此我们就地取材，通过灵芝人工栽培技术将这些农业废弃物变废为宝。本章实验中，我们研究了桑枝、药渣等农业废弃物在灵芝栽培中的应用，并通过响应面法对灵芝栽培配方进行优化。
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2.2.1 设备仪器
(1) 全温振荡培养箱：苏州培英实验设备有限公司；
(2) 电子分析天平：SicLOGEX 公司
(3) 超净工作台 SW-CJ-1FD ：苏州净化公司。
(4) 高压灭菌锅 HVE-50 ：日本 Hirayama 公司。
2.2.2 实验试剂
(1) KH2PO4：广州化学试剂厂
(2) PDA 培养基：广州化学试剂厂
(3) 酵母粉：OXOID 公司
(4) 葡萄糖：上海生工公司
(5) MgSO4：上海试剂四厂
(6) 无水乙醇：广州化学试剂厂
(7) 豆饼粉、玉米粉、麸皮：当地购买
2.2.3 培养基
灵芝(Ｇ.lucidum)AM21由本实验室提供。
PDA固体培养基：PDA40.1 g，加水定容至1000ml，115℃高压灭菌20 min；
MYG培养基：麦芽糖10g，葡萄糖4g，酵母粉4g，加水定容至1000ml，115℃高压灭菌20 min。
液体发酵培养基：玉米粉3%，豆饼粉1.5%，麸皮0.5%，加水煮沸1h，8层纱布过滤，滤液加葡萄糖2%，MgSO40.02%，KH2PO40.1%，酵母粉0.5%，搅拌溶解后加水定容至1000ml， 115℃高压灭菌20 min；
固体发酵培养基：桑树木屑63%，中药渣子20%，玉米粉10%，麸皮5%，石膏粉1%，蔗糖1%，MgSO40.02%，KH2PO40.1%，pH自然，料水比1：1.5。装袋密封，115℃高压灭菌1h。
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3.1 引言..............................................30
3.2 实验材料...............................................30
第四章灵芝面霜研究.....................................40
4.1 引言..............................................40
4.2 实验材料............................................40
第五章 总结与展望.......................................48
5.1 总结.....................................................48
5.2 展望................................................49
第四章灵芝面霜研究
灵芝的化学成分复杂多样，使得它在化妆品中的应用更加广泛。将灵芝提取物应用于化妆品中，它除了有保湿作用，还能使皮肤保持原有的功能，还能增加皮肤的白皙。灵芝提取物对胶原蛋白有生长促进作用，争强了皮肤的新陈代谢，灵芝提取液还具有抗氧化性，使得它被广泛的用作粉刺防治剂、减肥剂、保湿剂和皮肤美白剂。灵芝提取物中另一类重要的化合物是灵芝三萜，三萜类化合物能够净化血液，保护肝功能。有研究表明，灵芝在化妆品中具有以下功效：一、清除自由基延缓皮肤衰老；二、保湿作用；三、增白、祛斑作用；四、改善角质层更新皮肤；五、修复受损细胞、淡斑、美白、抗衰老、提高皮肤免疫力。已经获得国家食品药品监督管理总局批准的含有灵芝的产品包括：洁面乳、精华乳、乳液、化妆水、眼霜、祛斑霜、防晒霜、隔离霜、面霜、面膜、粉底液、粉底、香皂等。本试验是将用桑树、药渣人工栽培得到的灵芝子实体，进行超声辅助提取后得到的提取液加入到化妆品中，试验一款含有灵芝提取液的面霜。
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4.2.1 设备仪器
(1) 磁力搅拌器：SicLOGEX 公司
(2) 旋转蒸发器（RE52CS）：上海亚荣生化仪器厂
(3) 恒温水浴锅（DK-8D）：上海森信实验仪器有限公司
4.2.2 实验试剂
(1) 硬脂酸：深圳市辉乐达科技有限公司
(2) 单甘酯：深圳市辉乐达科技有限公司
(3) 十八醇：深圳市辉乐达科技有限公司
(4) 甘油：深圳市辉乐达科技有限公司
(5) 杏仁油：广东高岛化妆品有限公司
(6) 玻尿酸：广东高岛化妆品有限公司
(7) 蚕丝蛋白粉：广东高岛化妆品有限公司
(8) 玫瑰纯露：莱芜瑶草生物有限公司
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第五章 总结与展望
本论文首先探索了含水量、温度、湿度等对于以桑枝和药渣为培养基的灵芝栽培的影响，然后用响应面法对灵芝栽培培养基配方进行优化，从而生产出高品质的灵芝子实体；再用中心组合设计和响应面分析法对灵芝子实体中的多糖含三萜的提取工艺进行优化，确定出最佳提取工艺条件；接着研究了栽培灵芝提取液在化妆品开发中的应用。结果如下：
（1）为了综合利用桑枝、药渣等农业废弃物，本次实验将桑枝、药渣作为灵芝栽培料进行人工栽培灵芝的研究，通过探讨培养过程中的栽培料含水量、培养室温度、湿度以及培养室通风换气还有灵芝人工栽培过程中应该注意的细节等。成功探索出一套桑枝、药渣灵芝栽培方法。
用中心组合设计和响应面分析法对灵芝提取工艺进行优化，实验结果表明：灵芝多糖超声提取最佳工艺条件为：超声温度 80℃、超声时间 45min、料液比为1 比 25。此条件下多糖提取率为 5.39%。灵芝三萜超声提取最佳工艺条件为：超声温度 65℃、超声时间 45min、料液比为 1 比 25。在此条件下的总三萜提取率为 2.08%。
本文中的灵芝菌种可以利用桑枝、药渣做为栽培培养基，生产出高品质的子实体；经过响应面法优化后的灵芝栽培配方可以为今后工业化利用废弃的桑枝提供实验依据。与此同时本研究首次探索了中药药渣的另一种高附加值的利用方式，即和废弃的桑枝一起用于栽培灵芝，可以变废为宝，提高了栽培灵芝的药用品质。对于今后中药药渣的规模化利用，具有一定的启发意义。本论文应用响应面法优化了灵芝提取工艺，但也仅仅是对超声提取法进行了优化，今后还可以对微波提取法，微波-超声联合提取法
