1.1 引言
阿尔茨海默病又称老年性痴呆，是常见的神经系统退行性疾病之一，起病多在五十岁之后，研究表明 65 岁以上的老年人群中阿尔茨海默病发生率约为 13%，并且随年龄增长其发病率显著增加（年龄每增加 5 岁，其患病风险增加近 2 倍）。阿尔茨海默病发病率高，病因复杂，发病机制还不十分清楚，目前尚无有效的防治措施，预计 2050 年全世界阿尔茨海默病患者将超过一个亿。阿尔茨海默病已成为本世纪威胁老年人健康的主要“杀手”。阿尔茨海默病不仅给患者及其家庭带来了沉重的精神压力，也给社会带来了巨大的经济负担。世界卫生组织调查数据显示，每年全世界阿尔茨海默病患者的相关费用支出约占 60 岁以上人口疾病总支出的11.2％，2013 年仅美国阿尔茨海默病相关年度支出约 2030 亿美元。阿尔茨海默病的防治已经成为 21 世纪医疗卫生保健领域面临的最大挑战之一。目前全世界每年约超过二亿人接受麻醉和手术治疗，随着全球人口老龄化进程的加剧，其中老年患者的数量亦逐步上升，相关流行病学调查研究显示，美国大约 35％的接受手术治疗的患者是 65 岁以上老年人群。因此，越来越多的研究开始关注特定的外科手术和/或麻醉因素与阿尔茨海默病是否相关，探讨外科手术和麻醉可能对阿尔茨海默病的发生、发展产生的影响及其潜在病理机制，为临床工作提供理论依据，指导个体化治疗，推进精准医疗，具有重要的科学及社会意义。
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1.2 综述：吸入麻醉剂对阿尔茨海默病神经病理的影响
阿尔茨海默病（alzheimer's disease，AD）是常见的老年神经系统退行性疾病之一，起病隐匿且症状进行性恶化，临床症状主要包括渐进性记忆障碍，判断和推理等认知障碍，病理生理学方面以进行性神经元丢失，细胞外 β-淀粉样蛋白（amyloid-beta protein，Aβ）积聚形成的老年斑和神经元内过度磷酸化的 tau 蛋白形成的神经纤维缠结（neurofibrillary tangles，NFT）为特征[1-4]。AD 发病机制复杂，与多种因素相关，其病因目前尚不十分清楚，除与年龄增长密切相关之外，还与下列因素有关：（1）性别：女性发病率高于男性；（2）遗传因素：研究显示 19 号染色体的载脂蛋白E4 等位基因、21 号染色体的淀粉样前体蛋白基因、14 号染色体的早老基因 1 和 1 号染色体的早老基因 2 分别与散发和家族性 AD 相关；（3）神经细胞代谢的改变：Aβ 和 tau 等蛋白代谢异常、氧化应激、溶酶体代谢改变等均与 AD 的发生和发展密切相关；（4）递质的改变：主要包括胆碱能障碍，乙酰胆碱的减少与 AD 相关；（5）其他：血管相关危险因素、营养相关风险因素和头部外伤等[5-15]。AD 的多种相关风险因素中既包含年龄、性别和遗传因素等不可调节的因素，还包括营养状态和头部外伤等可调节和预防的因素。相关研究显示改变 AD 无症状临床前期患者的可调节危险因素可以显著降低 AD 发病率[16]。加拿大的一项流行病学调查研究显示，通过改变生活方式来调控相关风险因素，能够延迟 AD 的发病时间（约 2 年），减少 36%的病例，仅仅加拿大就可以减少总计约 2190 亿加元的经济负担[17]。由此可见，AD 的防治已成为本世纪亟待解决的重大课题之一。
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第 2 章 资料与方法
2.1 实验动物与主要试剂
12 月龄 APPswe/PSΔE9（APP/PS1）APP/PS1 双转基因小鼠购自中国医学科学院医学实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心，小鼠雌雄各半。小鼠于标准实验室条件（白天/黑夜 12 h:12 h ，温度 18~25℃, 湿度60%，4~5 只/笼）饲养。吸入麻醉剂七氟醚购自中国上海雅培公司；TUNEL试剂盒购自瑞士 Roche 公司；DCFH-DA 购自美国 Sigma 公司；小鼠 β-actin购自美国 Abcam 公司；抗 DNP 抗体购自美国 Abcam 公司；抗 Nitrotyrosin抗体购自美国 Abcam 公司；抗 Aβ42 抗体购自美国 Abcam 公司。
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2.2 实验动物分组及处理
将12月龄APP/PS1双转基因小鼠随机分为2组（n=30）：空白对照组（control组）和七氟醚组（Sevoflurane组）。空白对照组小鼠置于持续通入2 L/min氧气的麻醉箱中4 h；七氟醚组小鼠置于相同麻醉箱中给予2%的七氟醚麻醉，小鼠翻正反射消失提示已被麻醉，麻醉时间同样为4 h。麻醉箱中放置二氧化碳吸收剂、加温毯和红外线灯，麻醉过程中小鼠保持自主呼吸，监测小鼠的肛温、血压、心率和血氧饱和度。应用红外线吸收装置监测麻醉箱流出气体中七氟醚、氧气和二氧化碳的浓度。麻醉后吸入纯氧3 L/min，小鼠翻正反射恢复20 min后提示苏醒，将所有小鼠放回其各自笼中。
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第 3 章 结 果 ........... 16
3.1 两组 APP/PS1 双转基因小鼠海马神经元凋亡情况 ......... 16
3.2 两组 APP/PS1 双转基因小鼠海马神经元内 ROS 水平 ........... 16
3.3 小鼠海马神经元内氧化损伤蛋白羰基化合物和硝基化酪氨酸蛋白表达水平（IHC） ....... 17
3.4 两组 APP/PS1 双转基因小鼠海马神经元内氧化损伤蛋白羰基化合物........... 18
3.5 两组 APP/PS1 双转基因小鼠海马神经元内蛋白质聚集物透射电镜检测结果..... 190
3.6 两组 APP/PS1 双转基因小鼠海马神经元 Aβ42表达水平........21
第 4 章 讨 论 ........... 22
第 5 章 结 论 ........... 26
第 4 章 讨论
AD 潜伏期长，发病具有隐匿性，在临床发病前可有长达 15~30 年的临床前期（临床症状不明显），并且其发病机制复杂，尚无有效防治方法，因而，备受国内外学者关注。在大量的体外（细胞实验）和体内（动物模型和临床实验）相关实验研究的基础上，至今已建立 Aβ 级联学说、氧化应激学说等多种假说和相关动物模型，其中转基因动物模型因能够准确复制 AD 某些临床症状和病理特征而成为研究热点，APP/PS1 双转基因小鼠自 6 月龄开始在海马区形成大量 Aβ 沉积，因此，本研究选择此小鼠作为AD 动物模型[29]。 国内外流行病学调查和大量的实验研究证实，全麻药物是 AD 的诱发因素之一，能够增加 AD 发病风险，加剧其神经病理进程[18,89]。临床研究表明，与局麻比较，全麻能够明显增加心脏手术病人 AD 的发病风险[90]，Liu 等[91]研究结果显示全麻药能够促进认知功能障碍病人病程的进展。吸入麻醉剂七氟醚是临床常用全身麻醉药物之一，因此，本研究选择临床常用浓度 2%七氟醚，探究临床剂量七氟醚暴露对 AD 的相关影响。
结论
（1）12 月龄 APP/PS1 双转基因小鼠给予 2%七氟醚麻醉 4 h，能够诱导海马神经元凋亡，加重 AD 的神经病理损害。
（2）临床浓度七氟醚麻醉加剧 12 月龄 APP/PS1 双转基因小鼠海马神经元氧化应激损伤，促进蛋白质损伤和聚集。
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参考文献（略）
