1.2 方法
1.2.1 细胞培养
胆管上皮癌细胞株CCLP1置于含10%小牛血清的DMEM培养基中，于37℃、5%CO2孵箱中常规培养，0.125%胰酶+0.020%EDTA消化传代，六孔板每孔接种2×105个细胞，96板每孔接种5×103个细胞，贴壁24h后用于实验。
1.2.2 反转录PCR（RT-PCR）
六孔板每孔接种2×105 个细胞,以DMSO为对照，10μM PGE2处理CCLP1细胞24h后，用TRIzol Reagent方法提取RNA，测浓度后取2μg进行反转录（25μl体系）,取2μl cDNA,10μl SYGR GERRN PCR Master Mix,6μl ddH2O,上下游引物各1μl进行反应，引物序列如下：SnoN[6]sense：5′-TTTCTGCCTCTTCCATCACC-3′、anti-sense5′-GACTTGGGGCAAACAGAGTC-3，目的片段长度为150bp；GADPH sense:CACCCATGACGAACATGGG,anti-senseTTCCAGGAGCGAGATCCCT ，目的片段长度为175 bp。
1.2.3 WST试验
96孔板每孔种细胞100ul(细胞浓度为5×10 ³/ml）, 待细胞贴壁后 , 以DMSO为对照，加相关试剂处理24小时，弃培养上清液后，加入100μl无血清DMEM+10μl Cell Counting Kit-8，450nm检测细胞增殖能力。
1.2.4 细胞中SnoN的检测
六孔板每孔接种2×105个细胞，贴壁24h，以DMSO为对照，不同浓度PGE2处理细胞24h,10μM EP1-4受体激动剂处理24h，10μM PKA抑制剂H89预处理细胞30min后加10μM PGE2处理24h后，PBS终止反应，用细胞刮匙收集细胞，加入适量细胞裂解液冰上作用30min，冰浴下超声粉碎，15000g，离心30min。取上清，用BSA法定量蛋白浓度。取60-100μg上述蛋白在10%聚丙烯酰胺凝胶中电泳分离，电转至硝酸纤维素膜，封闭1h，一抗4℃孵育过夜，PBS-T洗涤后加二抗孵育2h，ECL显色系统检测SnoN的表达，以β-actin为内参照。X线胶片上的信号用Image-J软件进行统计分析。
1.2.5 统计学方法
采用 SPSS 10. 0 统计软件, 以P < 0.05 为显著性检验。
2 结果
2.1 PGE2促进CCLP1细胞SnoN蛋白的表达.
以DMSO为对照，实验组用1μM，5μM，10μM，20μM PGE2分别处理CCLP1细胞24h后，Western blot实验观察实验结果，用Image-J软件分析发现，细胞中SnoN蛋白的表达水平分别上升了13.4%，24.5%，35.6%，23.5%（P<0.05）,差异具有统计学意义(图1)。以DMSO为对照，用10μM PGE2处理CCLP1细胞24小时，Western blot实验观察到实验组细胞中SnoN的含量是对照组的1.17倍，差异具有统计学意义（图2）。
2.2 PGE2促进CCLP1细胞SnoN mRNA的表达。
以DMSO为对照，实验组用10μM PGE2处理24小时后，RT-PCR实验观察到实验组SnoN mRNA含量是对照组的1.22倍，差异具统计学意义(图3)。
2.3 四种EP受体激动剂对CCLP1细胞SnoN蛋白表达量及CCLP1细胞增殖能力的影响。
以DMSO为对照，实验组用10μM EP1-4四种受体激动剂(EP1:Prostaglandin E1 Alcohol，EP2:Butaprost，EP3:Sulprostone，EP4:17-phenyltrinor Prostaglandin E2)处理CCLP1细胞24h后，Western blot实验观察实验结果，用Image-J软件分析发现，EP2受体激动剂组细胞中SnoN蛋白的表达水平与对照组相比上升了64.9%，而EP1，EP3，EP4受体激动剂处理组细胞中SnoN蛋白表达量与对照组相比只分别上升了35.6% ，29.6%， 24.9%（图4）， 差异均具有统
