1材料与方法
1.1材料
本病例由犬主人送往深圳市福华宠物医院就诊的苏格兰牧羊犬｡切下的肿瘤送往华中农业大学动物医学院病理实验室制作蜡块并保存｡通过临床观察､组织学诊断结合免疫组织化学染色对一例犬外耳道肿瘤进行病理学诊断｡免疫组织化学中的CK染色发现增生的实质细胞为上皮细胞,而通过SMA染色可见腺上皮被覆一层完整的肌上皮细胞｡通过以上诊断方法确定该犬患为外耳道耵聍腺腺瘤｡
1.2试剂
鼠抗CK抗体(1∶200),鼠抗SMA抗体(1∶200),DAB显色液(固体),SABC试剂盒,5%BSA封闭液,以上试剂都购自武汉博士德生物工程有限公司;H.E.染色相关试剂(苏木素-伊红),自行配制｡1.3方法
1.3.1临床诊断
通过对该犬左侧外耳道肿瘤的视诊及触诊确定其位置､大小以及对机体的影响｡切除肿瘤后观察肿瘤特征｡
1.3.2肿瘤组织的病理学检查
将切除的肿块放在10%福尔马林溶液中固定3 d后取材､脱水､浸蜡､包埋｡并将组织切成3μm厚度的切片｡一部分进行H.E.染色,观察病理变化;另一部分进行免疫组织化学法(SABC)染色,对肿瘤进行更准确的诊断｡H.E.染色采用常规的染色方法;SABC法参考武汉博士德生物工程有限公司的即用型SABC免疫组化试剂盒内说明书｡
1.3.3采图与观察
将H.E.染色切片和免疫组化切片在显微镜下观察,并通过NIS-Elements高清晰度彩色图文分析系统配合Nikon80i生物光学显微镜对典型病变进行显微采图｡
2结果
2.1临床症状
患犬为苏格兰牧羊犬､雄性､13岁｡眼观肿物位于左侧外耳道,几乎占据了整个外耳道｡切除后观察肿物呈灰白色､质地硬,表面凹凸不平,形成乳头状结节,与周围组织界限清晰,无包膜,但易于剥离,无向周围组织浸润的现象｡本病例为13岁雄性苏格兰牧羊犬,肿瘤发生于左侧外耳道,眼观肿物呈灰白色,形成乳头状结节,与周围组织界限清晰｡
2.2病理组织学特征
镜下观察可以外侧为表皮层,表皮下有大量的结缔组织,将实质分成小的囊状结构,囊内实质细胞增生,向内凹陷,呈乳头状结构｡实质细胞外侧间质结缔组织中有多量的血管｡高倍镜下可见实质细胞有典型的顶浆分泌性腺特点,即内层为一层腺上皮,排列整齐,为立方上皮细胞｡腺上皮细胞核大而圆,细胞质嗜酸性,并且向胞外分泌嗜酸性物质｡细胞大小一致,异型性小;核分裂相少｡在腺上皮的外侧被覆一层肌上皮｡肌上皮外侧充满了结缔组织及血管､红细胞;同时,在结缔组织中有大量的炎性细胞浸润｡
可见在肿瘤的同时伴有外耳炎的发生｡免疫组织化学染色(IHC)可见,对肿瘤组织的CK染色可见,乳头状凸起外侧均被着上棕黄色,着色部位为细胞质,说明该肿瘤的增生细胞含有CK抗原,而内侧的结缔组织即血管则没有被着色;SMA染色可见,在结缔组织外侧与外层的立方上皮之间的一层细胞着色,着色部位为细胞质｡
3讨论
犬外耳道表面衬有皮肤,是体表皮肤的延生,其内含有毛､皮脂腺和管状的耵聍腺｡其外侧部分由软骨支撑,其他部分由骨支撑｡耵聍腺为顶浆分泌性腺,是一种变异的大汗腺,所以具有顶浆分泌性腺的特点｡组织学观察可见结缔组织将实质分成小的囊状结构;实质细胞增生,呈典型的顶浆分泌性腺体结构,核大而圆,异型性小,形成乳头状突起;间质中有多量的血管,并伴有炎性细胞浸润｡
对于犬肿瘤的确诊,主要是依据组织学诊断结合免疫组织化学的方法｡耵聍腺腺瘤在组织学上主要表现出耵聍腺的囊性增生,乳头状排列｡形成与正常耵聍腺或者顶浆分泌性腺相似的结构,并且具有腺上皮以及被覆的肌上皮的双层结构,腺上皮细胞中含有分泌的嗜酸性物质｡这种肿瘤常伴有外耳道炎,通过这种慢性刺激,使肿瘤有恶化的倾向｡
本试验通过H.E.染色可以发现肿瘤的增生组织与耵聍腺腺瘤相似,同时外侧细胞的特征,可以判定为顶浆分泌性腺｡而在免疫组织化学染色中,CK染色可判断增生的实质细胞来源于上皮组织;SMA染色结果可知腺上皮下被覆一层较完整的肌上皮｡
通过组织学与免疫组织化学染色结果,可以确定本犬所患为外耳道耵聍腺腺瘤｡同时,有文献报道,大多数的耵聍腺腺瘤会伴有炎症的发生,且老年犬多发｡问诊可知患病犬为13岁雄性犬,而在组织学观察中可见多量的炎性细胞浸润｡即为伴发炎症的老年犬,符合犬耵聍腺肿瘤的一般特性｡对于耵聍腺腺癌,癌细胞会以不同的方式排列,并且细胞核的异形性大等特点,同时具有向腮腺侵袭的可能;而对于混合性耵聍腺腺癌中在耵聍腺腺癌的基础上伴随有软骨和骨的增生,混合型耵聍腺腺瘤伴随有肌上皮的增生｡
参考文献:（略）
