研究模拟口腔条件下对蜂胶防龋作用
摘 要: 目的:探讨0.01%、0.04%两种浓度蜂胶溶液预防牙齿龋损的效果。帮写医学论文方法:在模拟口腔条件下,用细菌连续培养形成菌斑建立人工龋的方法,观察两种浓度蜂胶溶液的防龋效果,以2%氟化钠溶液、0.16%洗必泰溶液作阳性对照,以去离子水及溶剂(无水乙醇)作阴性对照。测定标本龋损深度及脱矿量,测定数据用SPSS8.0软件处理。结果:两种蜂胶溶液与阴性对照组比较,龋损程度明显降低(P<0.05),并优于2%氟化钠组,在脱矿量上两种蜂胶溶液比阴性对照组明显减少(P<0.05)。结论:蜂胶溶液能有效地降低龋病的发生。
关键词: 蜂胶;模拟口腔;龋病预防
龋病是在以细菌为主的多种因素影响下,牙齿硬组织发生慢性进行性破坏的一种疾病[1]。变形链球菌是主要的致龋菌,已被国内外学者所公认[2]。蜂胶对变形链球菌的抑菌作用已有报道[3]。为探讨蜂胶对变形链球菌致龋作用的影响,本试验在简易模拟口腔条件下,用细菌连续培养形成菌斑建立人工龋的方法,对蜂胶防龋效果进行了观察,并以2%氟化钠、0.16%洗必泰溶液作阳性对照,以去离子水及溶剂(无水乙醇)作阴性对照。
1 材料与方法
(1)模拟口腔的基本条件
温度设定在37℃,流通气体为微氧气体,其中CO2为15%,N2为85%;pH值为7.6;口腔内实验菌株培养基液为MS液体,其配方为:胰蛋白胨1%、大豆蛋白胨0.5%、蔗糖5%、葡萄糖0.1%、磷酸氢二钾0.4%。
(2)牙体标本的选择与制备
在立体镜镜下,选择牙釉质表面无白斑、裂隙和缺损的正畸减数拔除的双尖牙66颗超声清洗。除颊侧唇面中1/3留3×4mm的开窗区外,其余部分涂布指甲油保护,根端打孔拴钢丝备用。
(3)细菌的培养
细菌:变形链球菌C(S.mutans)和D(S.sobrinus)(由首都医科大学口腔医学院研究所提供的国际标准菌株)。先将MS液体高压灭菌,把变形链球菌C和D转种到MS液体中,在模拟口腔中培养48h,各取OD=0.1的菌液0.2ml,加入到已装有9mlMS培养基的试管中备用。
(4)标本的处理
将66个标本随机分为6组,每组11个标本,6组牙表面开窗区分别用去离子水、无水乙醇、2%氟化钠、0.01%蜂胶溶液、0.04%蜂胶溶液和0.16%洗必泰溶液处理2min,两次后高效紫外线灯消毒15min。
(5)人工龋损的形成
将处理过的牙标本分别悬吊于装有两种细菌的试管中,放入模拟口腔中进行培养,48h后取出标本,按照上述处理标本的方法连续处理两次,再次入模拟口腔内,并更换新鲜的培养液,48后取出全部标本,用大量自来水反复冲洗后准备磨片。
(6)观测方法
将各组标本作垂直于开窗区的纵磨片,厚度100um,用CMR软X线机拍摄软X线照片(条件:电压15KV;电流2.5MA;曝光时间12min,显影2min,定影5min,Kodark D-19正片),用计算机图像分析系统及TMR软件对软X线照片进行龋损深度和脱矿量的测定。
(7)统计学分析
用SPSS8.0软件对各处理组所测定的龋损深度和脱矿量的数值进行方差分析,采用q检验进行显著性差异的比较,显著性差异的P值取0.05。
2 结果
(1)用两种蜂胶溶液处理后的人工龋损较对照组及无水乙醇组处理龋损深度值小,并与此两组存在显著性差异,其中以用0.04%蜂胶溶液处理组为著,而与洗必泰处理组无显著性差异,优于2%氟化钠组。
(2)用两种蜂胶溶液处理组龋损脱矿量较去离子水处理组和无水乙醇处理组少,并存在显著性差异,而与氟化钠及洗必泰处理组无差异。结果表明蜂胶处理后的牙使所形成的人工龋损深度变浅,脱矿量减少,因此有一定的防龋效果,其作用与临床常用的2%氟化钠和洗必泰溶液相似,而0.01%和0.04%浓度间无差异。
3 讨论
人类口腔是一个特殊的生态环境,有特定的温度、湿度、pH值、流动气体生理条件等。由于口腔内菌群复杂,开放的口腔容易受环境变化的影响,因而很难在人体口腔内进行龋病发生发展及防治的实验。在发达国家,有研究者设计了模仿人类口腔生物学环境的体外模型人工口腔,进行口腔微生物学、龋病学、牙周病学等研究[4]。由于结构复杂价格昂贵,我国尚无条件制作或购买。我们在过去实验室的基础上建立模拟口腔,利用变形链球菌连续培养形成人工菌斑,建立人工龋的方法对蜂胶防龋效果进行观察[5]。本实验表明蜂胶在控制龋损深度方面已优于国际通用的防龋剂2%的氟化钠,在脱矿量的控制方面与2%氟化钠及0.16%的洗必泰效果相同。蜂胶含有多种抑菌活性物质,主要为酮类、酚类、挥发油及苯丙烯酸等。蜂胶对变形链球菌有较强的抑菌作用,已被过去的实验所证实[6]。变形链球菌是龋病的主要致病菌,其自身合成的葡萄糖转基酶(GTF)参与牙菌斑的基质形成,使变形链球菌易于在牙面上粘附与积聚,GTF还可粘附在牙釉质表面的获得性膜上,成为细菌在牙面粘附的受体。实验表明蜂胶中的多酚类抑菌成分可以打乱变形链球菌的细胞质、细胞壁,从而破坏变形链球菌自身合成GTF的功能[7],最终产生有效预防和干扰龋损的发生和发展。蜂胶是蜜蜂上颚腺液混合了花粉、树脂等形成的胶状物质,我国是农业大国,蜂胶资源丰富,价格低廉,无毒副作用,在龋病的防治中有较高的开发价值。
4 参考文献
[1]帮写医学论文 樊明文主编.口腔生物学[M].第一版,北京:人民出版社,1996,71.
[2] Brumfitt W. Antibiotic activity of natural products: I Propolis[J]. Microbios,1990,62:19-22.
[3] Steinbery D. Antibacterial effect of propolis and honey on oral bacteria[J]. Am J Dent,1996,6:236-239.
[4] 朱敏.人工口腔模型[J].国外医学口腔分册,1992,3:138-140.
[5] 肖悦.多种口腔细菌菌斑的牙釉质龋和根面龋模型建立[J].国外医学口腔医学分册,2000,5:316.
[6] Takaisi Kikuni NB. Electron microscopic and microcalorimetric investigations of the possible mechanism of the antibacterialaction of a defined propolis provenance[J]. Planta Med,1994,3:222-227.
[7] Koo H, Gomes BPFA, Rosalen PL, et al. In vitro antimicrobial activity of propolis and Arnica montana against oralpathogens[J]. Archives of Oral Biology,2000,45:141-148.
