第一章综述
生命体离不开核酸这个核心,它是生命体进行编译的密码,并且附带着一定的遗传讯息，表达着一定的信息。自从人类基因组计划开始以后，许多研究者都致力于核酸的研究。在核酸的组成结构中，在脱氧核糖核酸的组成结构中所含的四种碱基类型主要有:以及胸腺然而脱氧核糖核酸不同的是，核糖核酸四种碱基碱基类型为腺嘿吟、鸟嘿吟、胞嚓陡以及尿嚓陡。脱氧核糖核酸(DNA)具有双螺旋结构，它的特殊性促进了DNA研究技术的迅速发展。近年来，DNA的研究不但为人类基因组学做出了重大贡献，而且在医学疾病诊断、转基因食品安全以及法医鉴定等方面也起到了很大作用。
1.1核酸的研究意义
核酸是遗传信息的携带者，目前基于核酸的分析技术己经应用到了食品安全(转基因食品)、分子诊断学与遗传学、法医鉴定、临床研究等领域，并且给社会与经济带来了好的效益。在核酸的测定研究中，精确定量核酸是关键，并且伴随着临床医学和分子学的发展，核酸定量分析检测技术作为一项重要技术显得日益重要，准确的定量实验结果对于实验研究来说是非常重要的。同时准确的测量DNA的浓度对于许多涉及到核酸的分析过程是非常重要的，这些核酸分析过程主要包括不同的DNA操作
(克隆、测序以及基因表达)以及分子分析过程(聚合酶链反应以及实时聚合酶链反应)等。目前，许多研究机构都在对核酸含量的测定进行了一定的研究。此外，由于在细胞中核酸的含量相对来说比较稳定，并且在加工过程中其不易被破坏，同时由于核酸的检测技术具有操作简便、灵敏度高等特点，目前核酸检测技术也被应用到了转基因含量的检测，并且在转基因的含量检测研究中技术中成为了主要的技术。在核酸的研究中，DNA序列的准确测定也至关重要。自1995年第一台测序仪器出现，DNA的测序技术在法医鉴定、亲子鉴定、疾病的诊断、物种的辨别等方面得到了很大的应用，核酸序列测定的准确与否，也将影响着临床诊断、法医鉴定等结果的准确定与权威性。因此，核酸的研究是非常重要的。
1.2核酸的分析方法
自1985年聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction PCR)技术产生以来，因其具有高的敏感度、直接性、所用时间短、准确性高等优点，己经成为了生命科学领域中主要的实验工具。目前用于核酸含量测定的方法主要有实时定量PCR技术、核酸分子杂交技术、等温PCR方法、微流控芯片技术、高效液相色谱法以及质谱法等。实验在进行碱基含量的测定时还用到了电位滴定法。在对DNA序列的研究实验中，最早的序列测定技术是Sanger建立的DNA双脱氧链末端终测序法，以及Maxam和illbert建立的DNA化学降解测序法，随着测序技术的发展，相应的测序技术如毛细管电泳测序技术、质谱测序进一步应用到了DNA测序研究中。
1.2.1实时定量PCR法
实时定量PCR法是目前应用于核酸含量测定的主要的方法之一，它是通过应用特殊的PCR引物进行目标DNA序列扩增的。在进行实验的过程中所选用的荧光探针被固定在扩增产物上，随后经过DNA聚合酶的消化产生荧光信号。经过若干循环反应后，荧光信号得到了一定的积累，并且随着循环的进行荧光信号的积累与产生的PCR产物的数量是呈一定的比例的。应用此技术可以实现核酸的准确定量，同时此技术也被广泛的应用到了核酸的含量测定研究中。在应用实时定量PCR对核酸的含量进行检测时，由于此技术是在一个封闭的管中进行PCR扩增的，因此减少了实验过程中交叉污染的现象。目前市场上开发了不同的荧光检测系统。在实时定量PCR实验研究中常用的荧光探针为TaqM an探针，它是通过将正反向引物以及探针同时加到带扩增模板上来进行扩增实验。
第二章 核酸碱基腺嘌呤..............31-55
2.1 前言.............. 31
2.2 实验部分.............. 31-36
2.2.1 仪器和试剂.............. 32-33
2.2.2 实验方法.............. 33-36
2.3 结果与讨论.............. 36-52
2.3.1 非水电位滴定.............. 36-43
2.3.2 液相分析结果.............. 43-49
2.3.3 质谱分析结果.............. 49-50
2.3.4 红外光谱分析.............. 50-51
2.3.5 样品含水量检测.............. 51-52
2.3.6 灰分测定.............. 52
2.4 小结.............. 52-55
第三章 数字 PCR 测定.............. 55-65
3.1 前言.............. 55
3.2 实验部分.............. 55-57
3.2.1 仪器和设备.............. 55
3.2.2 实验方法.............. 55-57
3.3 结果与讨论 ..............57-63
3.3.1 RT-PCR 的结果.............. 57
3.3.2 dPCR 的结果.............. 57-61
3.3.3 不确定度.............. 61-63
3.4 小结.............. 63-65
第四章 采用质谱进行.............. 65-77
4.1 前言.............. 65
4.2 实验部分.............. 65-71
4.2.1 设备与材料.............. 65-66
4.2.3 实验方法.............. 66-71
4.3 结果与讨论.............. 71-75
4.3.1 纯化方法优化.............. 71
4.3.2 基质的选择.............. 71
4.3.3 测定结果.............. 71-75
4.4 小结.............. 75-77
结论
本文主要采用核酸定性以及定量的相关方法进行了碱基标准物质的研究、lambda DNA含量的测定、转基因油菜协同实验研究以及DNA序列质谱分析的研究，得出以下结论:
(1)在进行腺吟以及胞Aw的滴定实验过程中，由于两种碱基具有一定的弱碱性因此可以采用酸碱滴定进行实验，本文选择了无水冰醋酸作为溶剂，无水高氯酸溶液作为滴定剂并通过优化最终确定了高氯酸的浓度为0.05 mol/L。在对仪器参数进行优化后，最终确定采用增量模式进行滴定，并确定阂值大小为腺嘿吟阂值为41 mV/mL,胞嚓陡阂值为300 mV/mL。在进行阂值参数优化时，阂值应该在一阶导数最大值的1/2-2/3范围内。电位滴定法是分析化学中常用的一种定量方法，本文采用此法对两种碱基进行了含量测定，并申请了标准物质。
