寄生虫实验动物保种

关键词： 寄生虫 　　人类应用杀虫剂防制蚊虫已有70年历史。40年代初二二三问世后，在全球范围内均作为灭蚊的主要杀虫剂，但不到10年就发现蚊媒对二二三的抗药性成为灭蚊的主要障碍。我国在50年代中后期开始大规模使用有机氯等合成杀虫剂防制蚊虫，抗药性亦随着杀虫剂用量的增长和品种的发展而演变。 　　目前，库蚊抗药性的监测和研究报道较多，但有关嗜人按蚊抗药性的监测和研究较少［1～6］。媒介按蚊对杀虫剂敏感性监测是目前灭蚊防疟工作的重要内容之一。在嗜人按蚊区，进行杀虫剂敏感性测试，包括WHO推荐的区分剂量和LT50或LC50测试，是很有必要的。通过定期监测，了解蚊群对当时使用的杀虫剂的敏感程度，抗性的分布和程度，对可能替代的杀虫剂敏感性以及对已产生抗性的杀虫剂停止使用后蚊群敏感性恢复程度，为疟疾防治合理使用杀虫剂提供科学依据。现将国内各地有关嗜人按蚊对常用杀虫剂的敏感性监测概况介绍如下。 　　1　试验材料 　　1.1　成虫来源 　　采集从现场(监测点)捕获嗜人按蚊吸血的成蚊，带回实验室产卵孵化幼虫饲养，蛹羽化后24h内测定。或测试前夜捕捉刚吸血之蚊虫，带回实验室饲养至次日上午供测试用，此时胃血消化约在谢拉氏Ⅲ～Ⅳ期。 　　1.2　试验药物 　　二二三、马拉硫磷、溴氰菊酯和氯菊酯，含量在95%以上。 　　1.3　制备药膜滤纸 　　98%溴氰菊酯(法国产)，按WHO要求制作药膜滤纸，含溴氰菊酯3.57mg/m2(浓度0.01%)，8.93mg/m2(浓度0.025%)，或其它浓度。 　　2　测试方法 　　参照WHO　585号(1976)、655号(1980)、818号(1992)等技术报告；刘维德等：“七种病媒蚊类对拟除虫菊酯抗性分布及防治对策研究”；“我国尖音库蚊种团抗药性现状—兼论半数致死剂量与区分剂量的关系”。论述用蚊虫敏感品系LT99.9乘2或用死亡率99.9%～100.0%之间的剂量作为检测蚊类抗药性的区分剂量。 　　2.1　我国区分剂量法(我国推荐：溴氰菊酯3.57mg/m2，浓度0.01%) 　　蚊虫接触药膜滤纸30min，恢复饲养24h，记录死亡率。死亡率＞99%为敏感群体(S)，死亡率80%～98%为初步抗性群体(M)，死亡率＜80%为抗性群体(R)，并设空白对照。 　　2.2　WHO区分剂量法(WHO推荐：溴氰菊酯8.93mg/m2，浓度0.025%) 　　蚊虫接触药膜滤纸60min，恢复饲养24h，记录死亡率。设立对照和评判标准同上。 　　2.3　半数致死时间(LT50)测定 　　即以一种浓度测试不同接触时间(如15min、25min、35min、45min、55min)。接触后，将蚊虫置蚊笼内饲养24h，计算死亡率。至少重复实验1次，另设对照。死亡率按Abott公式校正，用回归分析方法计算LT50及LT95。 　　3　结果 　　3.1　区分剂量测定结果 　　3.1.1　四川的嗜人按蚊对四种杀虫剂在实验室和现场测定的结果　PP′－二二三接触1h，浓度在10.0g/L以上时，死亡率多数接近100.0%；在10.0g/L以下，死亡率只有67.78%。溴氰菊酯对实验室品系，浓度在0.6g/L～2.0g/L之间，接触30～60min，死亡率最高仅90.48%；现场测试浓度在0.01g/L以上，接触30～64min，死亡率在90.83%～100.0%。氯菊酯用1.0g/L浓度，接触60～64min，死亡率为93.33％～100.0%。马拉硫磷用1.0g/L浓度，接触16～32min，死亡率为96.30%～100.0%(表1)。 　　根据以上结果，初步建议嗜人按蚊对四种杀虫剂的区分剂量如下：PP′－二二三：浓度10g/L，1h；溴氰菊酯，浓度1.0g/L，接触30min；氯菊酯：浓度1.0g/L，接触1h;马拉硫磷：浓度1.0g/L，接触20min。 　　3.1.2　湖北省溴氰菊酯3.57mg/m2(浓度0.01%)区分剂量法测定的结果　湖北省从1990年开始以15mg/m2溴氰菊酯浸泡蚊帐灭蚊防疟。1995年调查结果表明，中华按蚊、嗜人按蚊成蚊对溴氰菊酯并未出现抗性。以WHO制订的区分剂量测试，浸帐4年组和浸帐1年组死亡率无区别，均为100%。但以我国推荐的区分剂量测试，虽无抗性群体，敏感群体亦只有2个，初抗群体占调查点的83%(表1)。这种差异似与两者的区分剂量不同有关，我国推荐的溴氰菊酯剂量为3.57mg/m2，WHO推荐的为8.93mg/m2。表1　嗜人按蚊对常用杀虫剂区分剂量的测试 省市县 杀虫剂 测试浓度 接触时间(min) 死亡率(%) 抗性级别 四川蒲江 二二三 7.5g/L 60 67.78 　　资阳 二二三 10.0g/L 60 99.15 　　名山 二二三 20.0g/L 60 100.0 　　实验室品系 二二三 7.5g/L 60 100.0 四川蒲江 溴氰菊酯 0.5g/L 40 95.24 　　资阳 溴氰菊酯 0.1g/L 30 93.18 　 　 　 60 100.0 　　名山 溴氰菊酯 0.01g/L 32 90.83 　 　 　 64 100.0 　　实验室品系 溴氰菊酯 0.6g/L 30 90.48 　 　 　 60 90.00 　 　 1.0g/L 30 79.17 　 　 　 60 75.00 　 　 2.0g/L 30 65.38 　 　 　 60 88.51 四川资阳 氯菊酯 1.0g/L 60 93.33 　 　 　 64 100.0 　　实验室品系 氯菊酯 1.0g/L 60 93.62 　 　 　 64 100.0 四川资阳 马拉硫磷 1.0g/L 32 100.0 　　实验室品系 马拉硫磷 1.0g/L 20 99.19 湖北天门 溴氰菊酯 0.01% 30 92.89 M 　　钟样 溴氰菊酯 0.01% 30 87.73 M 　　宜城 溴氰菊酯 0.01% 30 91.39 M 　　枣阳 溴氰菊酯 0.01% 30 91.89 M 　　襄阳 溴氰菊酯 0.01% 30 88.00 M 　　京山 溴氰菊酯 0.01% 30 98.69 M 　　随州 溴氰菊酯 0.01% 30 82.00 M 　　安陆 溴氰菊酯 0.01% 30 97.90 M 　　应城 溴氰菊酯 0.01% 30 81.73 M 　　汉川 溴氰菊酯 0.01% 30 90.55 M 　　云梦 溴氰菊酯 0.01% 30 100.0 S 　　广水 溴氰菊酯 0.01% 30 99.04 S 广东深圳 溴氰菊酯 0.01% 30 100.0 S 安徽舒城 二二三　 4.0% 60 89.70 　 林丹　　 0.80% 60 84.48 50为24.0min(LT99.9为138.50min)，乐山市市中心区LT50为16.90min(LT99.9为2 271.0min)，资阳LT50为20.9min(LT99.9为1 050.0min)，名山LT50为13.74min(LT99.9为801.0min。氯菊酯、马拉硫磷药膜滤纸浓度为1.0g/L时，LT50分别为6.14min、8.02min；LT99.9分别为1 065.0min、33.61min(表2)。 表2　嗜人按蚊对常用杀虫剂的半数致死时间(LT50)测试 省市县 杀虫剂 测定浓度(%) LT50(min) 95%可信限 LT95(min) 95%可信限 四川双流 溴氰菊酯 0.001 28.87 25.16～32.66 110.09 85.70～124.48 　　蒲江 溴氰菊酯 0.001 22.4 16.6～24.6 105.4 86.5～128.4 　 溴氰菊酯 0.016 1.4 1.0～1．5 6.6 5.4～8.0 　 溴氰菊酯 0.025 0.9 0.7～1．0 4.2 3.5～5.1 夹江青州 溴氰菊酯 0.001 4.36 3.72～5.1 14.17 12.11～16.6 　　三洞 溴氰菊酯 0.001 2.96 2.39～3.64 17 13.8～20.95 　　茶坊 溴氰菊酯 0.001 5.92 5.00～7.02 17.79 15.01～21.07 广东珠海 溴氰菊酯 0.005 19.81 16.27～24.13 安徽舒城 二二三　 　 1.145 4% 1.113 8～1.177 2 　 林丹　　 0.103 1% 　 0.086 6～0.119 6